鉴别促进黑色素生成的化合物的检定法及有关化合物制造技术

本发明专利技术提供了一种用于选择能改变皮肤色素沉着的化合物的体外检定法。本发明专利技术也提供了一类新的色素原化合物，它包含取代的芳族或杂环羧酸，或其衍生物，或其可药用盐，它们不含游离或被保护形式的酚、萘酚、苯硫酚或萘硫酚官能基。在一个优选的实施方案中，这些化合物将显示出对ＲＸＲ的活性。这些化合物可以用于改变人类皮肤和／或头发色素沉着的化妆品或皮肤病学组合物中，并可用于治疗影响皮肤或头发色素沉着的病症和疾病状态。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
鉴别促进黑色素生成的化合物的检定法及有关化合物的制作方法
技术介绍
正常皮肤颜色是由不同色素的混合物联合表达的结果，其中黑色素，一种褐色色素，是其主要成分。黑色素是由专门的、可在表皮内发现的黑素细胞合成的。黑素细胞在被称为黑素体的细胞器内合成黑色素。当黑素体被黑色素饱和时，它们被转运到黑素体的树状分支上并转化为外层角质形成细胞。随后这些角质形成细胞迁移到皮肤表面，导致皮肤呈现出褐色色素沉着。角质形成细胞中的黑色素的量决定了皮肤和头发色素沉着的程度。由于黑色素对皮肤和头发色素沉着的作用，已经进行了旨在鉴别影响黑色素生成和/或将黑色素转运到外层角质形成细胞的化合物的研究。这些化合物在改变头发和皮肤色素沉着方面有潜在的应用价值。例如，大家都知道，促黑激素(MSH)以及诸如茶碱的化合物能诱导色素沉着。此外，也已测试了MSH类似物促进皮肤色素沉着的临床效能。同时也有报道，α-脂蛋白可以刺激皮肤内黑色素的生成。(Jpn.kokai Tokyo,Koho,JP 82-153348,GB 2124900，由古巴的Empresa Cubana Importadora y Exportadora deProductos Medicos公司申请)。相反，也已经知道使用一些化合物来抑制色素沉着，例如来治疗黑斑病，如使用氢醌(HQ)和单苯醚(Pathak等人，《美国皮肤病学学会志》15:849-899(1986)；Smith等人，《色素细胞研究》1:386-389(1988))以及HQ的一种葡糖缀合物-熊果苷(《日本皮肤病研究学会论文汇编》12:138-139(1998))。并且，还有报道说，曲酸及其衍生物和/或戊酸能抑制黑色素形成(Jpn.kokai Tokyo,Koho,JP 03011010；日本Oyama,Yasuaki,Sansei药品有限公司)。另外，还有报道说，丙酸、丁酸和戊酸及其盐，与或不与不饱和脂肪酸结合，能抑制催化黑色素生成的酪氨酸酶的形成(Mishima等人，EPA345081，日本Hayashibara生化实验室)。EP0 509 241和WO93/19729描述了通过在一段足够长的时间内局部施用有效量的反式视黄酸可以进行过度色素沉着或者把皮肤晒黑。无论如何，这些办法中所使用的化合物会引起刺激。Dooley等人在《药理学》7:188-200(1994)中报道了一种旨在适于鉴别能抑制黑色素重新合成和潜在的抗黑素体的、细胞毒性化合物的体外方法。这种方法利用了两种永生化的黑素细胞来源的鼠细胞系，Mel-Ab(Dooley等人，《致癌基因》3:531-535(1988))以及其他成纤维细胞来源的鼠细胞系。Mel-Ab细胞来源于自发永生化的鼠C57BL/6黑素细胞系，这一细胞系在培养物中迅速生长并产生大量的黑色素。据报道该检定法用于筛选与在黑色素生物合成途径中的中间体具有类似结构的化合物，它们对于黑素细胞是唯一的。特别是筛选了与酪氨酸有关的对位取代的酚和与多巴有关的1,2-二羟基苯，以及1,3-二羟基苯、1,4-二羟基苯、1,4-二甲氧基苯和1,4-苯醌。利用这种筛选方法鉴别了几种旨在改变色素沉着的化合物。但是，与本专利技术不同，这种体外筛选方法利用的是永生化的鼠细胞系，而不是正常的人黑素细胞。不过，如果能鉴别出其他影响色素沉着和黑色素生成和/或转运的化合物将是有益的。如果能鉴别出可良好耐受且对皮肤无刺激性的化合物也将是有益的。此外，如果开发出一种用于鉴别这些化合物的改进的体外筛选检定法将是有用的。本专利技术的目的及简要描述最终，本专利技术的一个目的是提供一种新的用于鉴别能改变(增强或抑制)由黑素细胞、优选人黑素细胞表达的黑色素的化合物的检定法。本专利技术的另一个目的是提供皮肤病学/化妆品/药物组合物，该组合物包含由这种检定法确定的至少一种促进或抑制黑色素量的化合物。本专利技术更特别的一个目的是提供能局部施用的皮肤病学/化妆品/药物组合物，该组合物包含增强或抑制黑色素量的至少一种能改变(增强或抑制)人黑素细胞生成黑色素的化合物。本专利技术的甚至更特别的一个目的是提供皮肤病学/化妆品/药物组合物，该组合物包含增强或抑制黑色素量的至少一种取代的芳族或杂环羧酸或其衍生物，条件是所述羧酸不包含游离的或被保护基保护的酚、萘酚、苯硫酚或萘硫酚官能基。本专利技术的另一个特别目的是提供一种改变需要这种治疗的受治疗者的皮肤和/或头发色素沉着的方法，该方法包含在一段足够长的时间内局部施用一种有效量的含有至少一种影响(增强或抑制)黑色素的类视色素样化合物的组合物，以诱导皮肤和/或头发色素沉着。本专利技术的更特别的一个目的是提供一种改变-增加或减少-需要这种治疗的受治疗者的皮肤和/或头发色素沉着的方法，该方法包含在一段足够长的时间内局部施用一种有效量的含有至少一种取代的芳族或杂环羧酸或其衍生物的组合物，以影响皮肤和/或头发的色素沉着，但条件是所述羧酸不包含游离或被保护的酚、萘酚、苯硫酚或萘硫酚基。附图的简要描述附图说明图1含有按照本专利技术确定的能影响黑色素生成的化合物的结构；图2至4列出了可以使用本专利技术的化合物治疗的色素性疾病。专利技术详述在第一个实施方案中，本专利技术提供了一种新的用于鉴别能改变(增加或抑制)人黑素细胞表达黑色素的化合物的检定法，优选能增加人黑素细胞生成黑色素的化合物。一般说来，该检定法将检验特定化合物或化合物的组合物对培养物中人黑素细胞生长或增殖的作用，以及所述相同化合物对所述培养的人黑素细胞生成黑色素的作用，在所述培养的人黑素细胞(增殖)数量的基础上校准黑色素含量，并在每个细胞中黑色素的生成增加或减少的基础上确定影响黑色素生成的化合物。更具体地说，该检定法将包括(ⅰ)使至少两种人黑素细胞培养物与至少一种要就其对黑色素生成的作用进行筛选的化合物接触；(ⅱ)测量某个所述人黑素细胞培养物中含有的黑素细胞的增殖情况；(ⅲ)测量第二个人黑素细胞培养物中含有的黑色素的量；(ⅳ)将步骤(ⅱ)和(ⅲ)中得到的数据进行对比，目的是确定这些化合物对黑色素生成的作用(增加或减少)，并在所述培养物中含有的黑素细胞的量的基础上校准数据；(ⅴ)进一步将步骤(ⅱ)和(ⅲ)中得到的数据与在和前述培养物相同但是不加入所述化合物的条件下培养的对照人黑素细胞培养物的增殖和黑色素生成数据进行对比；(ⅵ)在有所述化合物存在下培养的黑素细胞产生的黑色素相对于未与所述化合物接触的对照培养物中产生的黑色素的量增加或减少的基础上，鉴别出所筛选的化合物中能改变(增加或减少)人黑素细胞表达黑色素的化合物。该方法将优选通过从合适的来源获得人黑素细胞、例如新生儿皮肤黑素细胞来完成。然后将这些黑素细胞同时种植到两个细胞培养室、例如一个96孔平板和一个24孔平板中。当这些细胞已被容许黏附到孔的表面上以后，用固定量的特定化合物培养各个孔，从而确定它们对黑色素表达的作用。这种培养将持续一段足以就这些化合物对由这些培养的黑素细胞生成黑色素的作用，如果有的话，进行评估的时间。然后培养将持续从约1分钟至约1个月不等的时间，更优选从约1小时至约两周，首选从约12小时至约1周。培养结束后，评估其中一个所述培养物中细胞的增殖情况。这可以利用合适的方法、例如利用吸光度来完成。在一个优选的实施方案中，96孔平板中的细胞用3-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于改变（促进或抑制）人的皮肤和／或头发的色素沉着的美容、皮肤病学和／或治疗方法，该方法包含在一段足够长的时间内局部施用有效量的至少一种取代的芳族或杂环羧酸、其衍生物或其可药用盐，从而诱导皮肤和／或头发色素沉着，条件是所述羧酸不含游离的或被保护基保护的酚、萘酚、苯硫酚或萘硫酚官能基。

【技术特征摘要】
US 1998-5-6 60/084,4781.一种用于改变(促进或抑制)人的皮肤和/或头发的色素沉着的美容、皮肤病学和/或治疗方法，该方法包含在一段足够长的时间内局部施用有效量的至少一种取代的芳族或杂环羧酸、其衍生物或其可药用盐，从而诱导皮肤和/或头发色素沉着，条件是所述羧酸不含游离的或被保护基保护的酚、萘酚、苯硫酚或萘硫酚官能基。2.如权利要求1的方法，其中所述化合物是一种能促进人皮肤和/或头发色素沉着的类视色素信号分子。3.如权利要求1的方法，其中所述化合物选自4-[1-(5,6,7,8-四氢-5,5,8,8-四甲基-2-萘基)乙烯基]苯甲酸；3-[3-(5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氢-萘-2-基)-苯基]-丙烯酸；3-[3-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氢-萘-2-基)-苯基]-丁-2-烯酸；6-[1-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氢-萘-2-基)-环丙基]-烟酸；3-[3-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氢-萘-2-基)-苯基]-丙烯酸；4-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氢-萘-2-羰基)-苯甲酸；4-(3-溴-5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氢-萘-2-基氧)-苯甲酸；5-[(E)-2-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氢-萘-2-基)-丙烯基]-噻吩-3-羧酸；3-[3-(5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氢-萘-2-基硫烷基)-苯基]-丙烯酸；6-(3-丁基-5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氢-萘-2-基硫烷基)-烟酸；4-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氢-2-萘基硫代)-苯甲酸；3-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氢-2-萘基)苯基丙炔酸；和6-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氢-2-萘基硫代)烟酸。4.如权利要求1的方法，它用于促进人皮肤变成褐色或晒黑。5.如权利要求1的方法，它用于促进人头发着色。6.如权利要求1的方法，其中所述化合物包含在可局部施用的组合物中，所述组合物含有相对于该组合物总重来说0.001-30重量％的所述化合物。7.如权利要求1的方法，其中所述化合物的量为组合物的0.5-15重量％。8.一种经局部施用后能改变人皮肤和/或头发色素沉着的药物/化妆品/皮肤病学组合物，它包含(ⅰ)适量的至少一种取代的芳族或杂环羧酸化合物、其衍生物或其可药用盐，条件是所述化合物不含游离或被保护的酚、萘酚、苯硫酚或萘硫酚基，该化合物能有效地改变人皮肤和/或头发的色素沉着；和(ⅱ)一种药物学、化妆品学或皮肤病学上可接受的载体。9.如权利要求8的组合物，其中所述化合物选自4-[1-(5,6,7,8-四氢-5,5,8,8-四甲基-2-萘基)乙烯基]苯甲酸；3-[3-(5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氢-萘-2-基)-苯基]-丙烯酸；3-[3-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氢-萘-2-基)-苯基]-丁-2-烯酸；6-[1-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氢-萘-2-基)-环丙基]-烟酸；3-[3-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氢-萘-2-基)-苯基]-丙烯酸；4-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氢-萘-2-羰基)-苯甲酸；4-(3-溴-5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氢-萘-2-基氧)-苯甲酸；5-[(E)-2-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氢-萘-2-基)-丙烯基]-噻吩-3-羧酸；3-[3-(5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氢-萘-2-基硫烷基)-苯基]-丙烯酸；6-(3-丁基-5,5...

【专利技术属性】
技术研发人员：D伦格塔，
申请(专利权)人：盖尔德马研究及发展公司，
类型：发明
国别省市：FR[法国]