一种酮还原酶及依折麦布中间体的酶催化制备方法技术

本申请公开了一种酮还原酶及依折麦布中间体的酶催化制备方法，所述酶催化制备方法以(4S)‑3‑[5‑(4‑氟苯基)‑1,5‑二氧代戊基]‑4‑苯基‑2‑恶唑烷酮为底物，在辅酶、辅酶循环体系、有机溶剂、金属盐和酮还原酶存在的条件下反应，得到(4S)‑3‑[(5S)‑5‑(4‑氟苯基)‑5‑羟基戊酰基]‑4‑苯基‑1,3‑氧氮杂环戊烷‑2‑酮的反应液。与其他依折麦布中间体的制备方法相比，本申请提供的酶催化合成依折麦布中间体的路线简单，反应条件温和，避免了化学合成法的繁琐步骤，还解决了现有酶催化技术中酶用量大、单位酶活低、后处理提纯产物困难的问题。本申请公开的制备方法降低了依折麦布中间体的生产成本，经济环保，具有很好的工业应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本申请属于生物催化，特别涉及一种酮还原酶及依折麦布中间体的酶催化制备方法。

技术介绍

1、(4s)-3-[(5s)-5-(4-氟苯基)-5-羟基戊酰基]-4-苯基-1,3-氧氮杂环戊烷-2-酮是合成药物依折麦布非常重要的中间体，依折麦布(ezetimibe)是由默克和先灵葆雅公司共同研制，第一个被批准上市的选择性抑制胆固醇吸收的药物，2007年在中国上市。依折麦布的作用机理是主要阻断胆固醇的外源性吸收途径，通过作用于胆固醇转运蛋白抑制肠道内胆固醇的吸收，对治疗原发性高胆固醇血症、家族性纯合子高胆固醇血症、纯合子谷甾醇血症、混合性高脂血症和冠心病都有一定作用。

2、schering公司的专利us6207822公开了一种制备方法，该方法可实现依折麦布的较高产率。此方法中，在氮杂环丁酮中间物形成前而且在恶唑烷酮中间物形成之后，该羰基被立体选择性还原成一醇类产物。然而，此方法使用了昂贵的cbs立体选择还原剂。

3、公告号为cn102186972b专利技术名称为“用于立体选择性生产(4s)-3-[(5s)-5-(4-氟苯基)-5-羟基戊酰基]本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种依折麦布中间体的酶催化制备方法，其特征在于，所述酶催化方法的制备路线以(4S)-3-[5-(4-氟苯基)-1,5-二氧代戊基]-4-苯基-2-恶唑烷酮为底物，在辅酶、辅酶循环体系、有机溶剂、金属盐和酮还原酶存在的条件下反应，得到含依折麦布中间体(4S)-3-[(5S)-5-(4-氟苯基)-5-羟基戊酰基]-4-苯基-1,3-氧氮杂环戊烷-2-酮的溶液。

2.根据权利要求1所述的酶催化制备方法，其特征在于，所述的酮还原酶编码基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:3、5、7所示，所述酮还原酶的氨基酸序列如序列表SEQ IDNO:4、6、8所示；所述(4S)-3-[5...

【技术特征摘要】

1.一种依折麦布中间体的酶催化制备方法，其特征在于，所述酶催化方法的制备路线以(4s)-3-[5-(4-氟苯基)-1,5-二氧代戊基]-4-苯基-2-恶唑烷酮为底物，在辅酶、辅酶循环体系、有机溶剂、金属盐和酮还原酶存在的条件下反应，得到含依折麦布中间体(4s)-3-[(5s)-5-(4-氟苯基)-5-羟基戊酰基]-4-苯基-1,3-氧氮杂环戊烷-2-酮的溶液。

2.根据权利要求1所述的酶催化制备方法，其特征在于，所述的酮还原酶编码基因的核苷酸序列如序列表seq id no:3、5、7所示，所述酮还原酶的氨基酸序列如序列表seq idno:4、6、8所示；所述(4s)-3-[5-(4-氟苯基)-1,5-二氧代戊基]-4-苯基-2-恶唑烷酮底物的浓度为50～300g/l；所述酮还原酶以菌体形式加入，所述菌体浓度为5～60g/l。

3.根据权利要求1-2所述的酶催化制备方法，其特征在于，所述酮还原酶还可以以菌体破壁后的液体酶、酶粉、固定化细胞或固定化酶粉中的一种或几种形式参与反应。

4.根据权利要求1-3所述的酶催化制备方法，其特征在于，所述的辅酶为nad或nadp，辅酶的用量为底物(4s)-3-[5-(4-氟苯基)-1,5-二氧代戊基]-4-苯基-2-恶唑...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏泽坤，洪忠杰，孙奋帅，赵加伦，吴鑫炜，傅文豪，王颖虹，陈海滨，杨欣航，
申请(专利权)人：宁波酶赛生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：