【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及酶突变改造，具体为酶催化合成植物源胆固醇手性中间体的方法。
技术介绍
1、植物源胆固醇类手性中间体是众多甾体药物（如皮质激素、避孕药及抗肿瘤药）合成的重要前体，传统化学及半合成路线多步、条件苛刻、选择性差且环保性能差；生物催化技术由于其温和条件、高区域和立体选择性成为研究热点，但仍受限于酶的来源与稳定性、底物通量及辅因子再生效率，整体转化率和工艺经济性难以满足工业化需求。针对上述问题，亟需发展一种高效、环保且具备优异区域／立体选择性的生物催化合成工艺。
2、植物源胆固醇及其衍生物是制备甾体激素和甾体类药物的关键中间体，全球相关市场规模超百亿美元，且呈持续增长趋势。以大豆、棕榈等植物提取物为原料的半合成工艺虽已工业化，但仍需多步化学改性才能获得目标手性中间体，工艺复杂且成本高昂。
3、传统化学全合成或半合成多依赖强酸、重金属催化剂及高温高压条件，不仅环境污染严重，而且区域选择性和立体选择性难以精准控制，副产物多且后续分离纯化难度大，降低了原子经济性和产品纯度。
4、生物催化合成是指利用天然...
【技术保护点】
1.一种酶催化合成植物源胆固醇手性中间体的方法，其特征在于，以3位为酯基的甾体为底物，加入三酰甘油脂肪酶、3-酮基还原酶进行酶催化反应，将3位酯基进行水解、还原得到3β-羟基的甾体，即得到植物源胆固醇手性中间体；所述三酰甘油脂肪酶的氨基酸序列由SEQ ID NO:1所示的野生型三酰甘油脂肪酶经T287A突变得到；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述3-酮基还原酶由SEQ ID NO:3所示野生型氨基酸序列经G190A突变得到。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述底物为化合物1，所述植物源胆固醇手性中间体为化合物4，结构式
【技术特征摘要】
1.一种酶催化合成植物源胆固醇手性中间体的方法，其特征在于，以3位为酯基的甾体为底物，加入三酰甘油脂肪酶、3-酮基还原酶进行酶催化反应，将3位酯基进行水解、还原得到3β-羟基的甾体，即得到植物源胆固醇手性中间体；所述三酰甘油脂肪酶的氨基酸序列由seq id no:1所示的野生型三酰甘油脂肪酶经t287a突变得到；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述3-酮基还原酶由seq id no:3所示野生型氨基酸序列经g190a突变得到。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述底物为化合物1，所述植物源胆固醇手性中间体为化合物4，结构式分别为：
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酶催化反应过程在nad(p)/nad(p)h辅酶循环系统协同作用下进行。
5....
【专利技术属性】
技术研发人员：许檬丹，何鑫，汪声晨，朱梦琴，姚玲，应娟，代先华，马璐璐，程雅洁，方磊，
申请(专利权)人：黄冈人福药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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