一种用于田间现场可视化检测梨火疫病菌的RPA-LFD引物组、方法及其应用技术

本发明专利技术涉及农业生物技术领域，具体提供了一种用于田间现场可视化检测梨火疫病菌的RPA‑LFD引物组、方法及其应用。所述引物包括上游引物EaF、下游引物EaR和探针Ea‑pro，所述方法包括：通过制备梨火疫病样品浸出液作为反应模版，基于所述引物组进行RPA‑LFD反应，根据LFD试纸条上的质控线(C)和检测线(T)条带有无来判定检测结果。该方法无需提取DNA，具有较高的通用性和特异性、检测灵敏度可达5×10‑6ng/μL和1×102CFU/mL，比现有快速检测方法有显著提升。为田间快速精准诊断、植物繁殖材料带菌检测以及病害防控效果评价提供技术支撑。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于农业生物，更具体的说是涉及一种用于田间现场可视化检测梨火疫病菌的rpa-lfd引物组、方法及其应用。

技术介绍

1、新疆得天独厚的地理环境使其果树产业在我国占据战略性地位，是全国重要的农产品生产供给地，也是世界六大果品生产带之一。近年来随着果树的大面积单一种植和降雨量的增多，果树病害发病严重，其中最典型的就是梨火疫病。梨火疫病，又称枝枯病，是由解淀粉欧文氏菌(erwinia amylovora，简称梨火疫病菌)引起的检疫性细菌病害，也是首个被分离和鉴定的植物病害。自1780年在美国纽约州的哈德孙河流域被发现以来，渐次向全球蔓延，目前已传播至五大洲的六十余个国家。作为我国的局部入侵物种，梨火疫病于2015年从新疆伊犁霍城县传入中国，之后迅速蔓延至新疆、甘肃两个省区的七十多个市(县)区。梨火疫病菌寄主范围广范，可侵染梨属(pyrus)、苹果属(malus)、榅桲属(cydonia)、枇杷属(eriobotrya)、草莓属(fragaria)、蔷薇属(rosa)、草地蔷薇属(rosablanda)和绣线菊属(spiraea)等40个属的220余种植本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种RPA-LFD引物组合物，其特征在于，所述引物组包括上游引物Ea-F、下游引物Ea-R和探针Ea-pro，

2.根据权利要求1所述的引物组合物，其特征在于，下游引物Ea-R的5'端有一个生物素基团；探针Ea-Pro的5'端标记一个羧基荧光基团FAM，探针Ea-Pro的3'端标记一个修饰基团C3-Spacer。

3.包含权利要求1～2任一项所述引物组合物的试剂盒。

4.权利要求1～2任一项所述引物组合物或权利要求3所述的试剂盒在梨火疫病菌检测或辅助检测中的应用。

5.权利要求1～2任一项所述引物组合物或权利要求3所述的试剂盒在制备梨火...

【技术特征摘要】

1.一种rpa-lfd引物组合物，其特征在于，所述引物组包括上游引物ea-f、下游引物ea-r和探针ea-pro，

2.根据权利要求1所述的引物组合物，其特征在于，下游引物ea-r的5'端有一个生物素基团；探针ea-pro的5'端标记一个羧基荧光基团fam，探针ea-pro的3'端标记一个修饰基团c3-spacer。

3.包含权利要求1～2任一项所述引物组合物的试剂盒。

4.权利要求1～2任一项所述引物组合物或权利要求3所述的试剂盒在梨火疫病菌检测或辅助检测中的应用。

5.权利要求1～2任一项所述引物组合物或权利要求3所述的试剂盒在制备梨火疫病菌检测或辅助检测试剂中的应用。

6.一种用于田间现场可视化检测的梨火疫病菌的rpa-lfd方法，其特征在于，采用权利要求1～2任一项所述引物组合物或权利要求3所述的试剂盒进行rpa-lfd检测。...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐进，韩文超，许景升，李志明，王皓，冯洁，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：