β-糖苷酶Bgl1269突变体及其催化水解大豆异黄酮糖苷的应用制造技术

本发明专利技术涉及β‑糖苷酶Bgl1269突变体及其催化水解大豆异黄酮糖苷的应用，β‑糖苷酶Bgl1269突变体是将SEQ ID No.1所示氨基酸序列第47位的苏氨酸突变为丙氨酸。基于序列和结构的半理性设计和运用定点突变的方法，通过实验筛选优异变体以提高β‑葡萄糖苷水解酶Bgl1269的热稳定性，其中最佳变体酶为T47A，其最佳温度Tm为45℃，半失活温度是T50是51.36℃，相对野生酶分别提高了5℃和4.15℃。45℃下半衰期T1/2为1.64±0.03h，是野生酶的4.6倍；数据显示T47A结合大豆苷和染料木苷的能力及催化能力均高于野生酶，催化效率kcat/Km分别提高了44.38％和39.01％。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及酶工程，尤其是β-糖苷酶bgl1269突变体及其催化水解大豆异黄酮糖苷的应用。

技术介绍

1、大豆异黄酮糖苷是大豆中异黄酮类化合物与葡萄糖结合形成的化合物，属于植物黄酮类物质，是大豆异黄酮的主要存在形式，占大豆中异黄酮总量的97％～98％。大豆异黄酮糖苷难以被人体吸收，但其水解产生的大豆异黄酮苷元可被人体高效吸收，发挥抗氧化、免疫调节、预防骨质疏松等生理作用。苷元与雌激素受体结合，可发挥类雌激素或抗雌激素作用，在体内雌激素水平较低时，表现为雌激素样作用；而在雌激素水平较高时，表现为抗雌激素作用。糖苷形式的异黄酮需要水解转化为相应的苷元。大豆异黄酮属于氧苷类，水解方法主要包括：酸水解法和酶水解法。

2、酸水解法存在的不足主要在于反应温度高，对设备要求高，设备投入较大。于丽颖等研究复合有机酸催化工艺为在苹果酸:柠檬酸为4:3的酸性条件下，恒温135℃反应160分钟，其水解率达到97.0％以上。酶水解法是目前国际上研究较多的方法，其优点是水解条件温和、产物稳定且纯度高，酶水解大豆异黄酮糖苷是最具有发展前景的工艺。p>

3、β-葡本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种β-糖苷酶Bgl1269突变体，其特征在于：所述β-糖苷酶Bgl1269突变体是将SEQID No.1所示氨基酸序列第47位的苏氨酸突变为丙氨酸。

2.根据权利要求1所述的β-糖苷酶Bgl1269突变体，其特征在于：所述β-糖苷酶Bgl1269突变体是将SEQ ID No.1所示氨基酸序列第47位的苏氨酸突变为丙氨酸且第374位的苏氨酸突变为丝氨酸。

3.一种编码如权利要求1或2所述β-糖苷酶Bgl1269突变体的核酸。

4.一种包含如权利要求3所述核酸序列的重组表达载体。

5.一种包含如权利要求4所述重组表达载体的重组表达转化体。...

【技术特征摘要】

1.一种β-糖苷酶bgl1269突变体，其特征在于：所述β-糖苷酶bgl1269突变体是将seqid no.1所示氨基酸序列第47位的苏氨酸突变为丙氨酸。

2.根据权利要求1所述的β-糖苷酶bgl1269突变体，其特征在于：所述β-糖苷酶bgl1269突变体是将seq id no.1所示氨基酸序列第47位的苏氨酸突变为丙氨酸且第374位的苏氨酸突变为丝氨酸。

3.一种编码如权利要求1或2所述β-糖苷酶bgl1269突变体的核酸。

4.一种包含如权利要求3所述核酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：齐莉莉，王进波，刘崯晖，梅含放，柯智健，王梦婷，彭妍妍，
申请(专利权)人：浙大宁波理工学院，
类型：发明
国别省市：