【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及固定化酶生物催化，尤其涉及一种利用大孔树脂ads-17固定化lu酶并将固定化磷脂酶应用于催化水解制备溶血磷脂的方法。
技术介绍
1、磷脂酶lecitase® ultra（lu）是一种通过转基因米曲霉生产的磷脂酶，能够特异性水解磷脂，生成α-溶血磷脂和游离脂肪酸。尽管lu在工业上应用广泛，但目前市场上仅提供游离形式，存在稳定性差、难以回收和重复使用的局限性，增加了生产成本。常用的磷脂改性方法有物理法、化学法和酶法，其中，采用酶制剂对磷脂进行催化，具有反应温和、反应效率高、专一性强、不破坏天然磷脂的构型、副产物少、安全性高等优点。目前用于磷脂改性较多的酶是专一性较强的磷脂酶，包括磷脂酶a1、磷脂酶a2等。磷脂酶能催化磷脂的水解反应，并在一定酰基的受体和供体存在下催化酯化反应和酯交换反应，对磷脂的结构进行各种改变或修饰，得到不同结构和用途的磷脂。虽然游离磷脂酶a1和a2是高催化活性、高度专一性的生物催化剂，但它们存在以下缺点：(1)稳定性较低，易发生聚集，影响催化效率；(2)对于高温、强酸、强碱、有机溶剂耐受性差，立体化学结构易...
【技术保护点】
1.一种利用固定化磷脂酶LU@ADS-17催化水解制备溶血磷脂的方法，其特征在于，所述的利用固定化磷脂酶LU@ADS-17催化水解制备溶血磷脂的方法是利用大孔树脂ADS-17及LU酶制备固定化磷脂酶，并将其应用于催化水解生成溶血磷脂的制备方法，是将功能化的大孔树脂ADS-17浸泡于LU酶液中，摇床振荡，通过物理吸附和化学吸附将LU酶固定于大孔树脂ADS-17上，制备得到固定化磷脂酶LU@ADS-17，然后将大豆磷脂与去离子水混匀均质后，加入固定化磷脂酶，搅拌反应，得到产物；具体步骤包括：
2.根据权利要求1所述的利用固定化磷脂酶LU@ADS-17催化水解制...
【技术特征摘要】
1.一种利用固定化磷脂酶lu@ads-17催化水解制备溶血磷脂的方法，其特征在于，所述的利用固定化磷脂酶lu@ads-17催化水解制备溶血磷脂的方法是利用大孔树脂ads-17及lu酶制备固定化磷脂酶，并将其应用于催化水解生成溶血磷脂的制备方法，是将功能化的大孔树脂ads-17浸泡于lu酶液中，摇床振荡，通过物理吸附和化学吸附将lu酶固定于大孔树脂ads-17上，制备得到固定化磷脂酶lu@ads-17，然后将大豆磷脂与去离子水混匀均质后，加入固定化磷脂酶，搅拌反应，得到产物；具体步骤包括：
2.根据权利要求1所述的利用固定化磷脂酶lu@ads-17催化水解制备溶血磷脂的方法，其特征在于，所述的大孔树脂ads-17的活化，具体为：将大孔树脂ads-17置于烧杯中，加入95%乙醇，密封避光浸泡24小时；随后，使用循环水真空泵抽滤，并用超纯水多次洗涤，直至无乙醇气味；将树脂转移至新的烧杯，加入5%盐酸溶液，密封避光浸泡4小时；抽滤盐酸溶液后，用超纯水反复洗涤，直至滤液ph调节至7.0；然后将树脂转移至烧杯，加入5%氢氧化钠溶液，继续浸泡4小时；抽滤后，用超纯水多次洗涤，直至ph恢复至7.0；最后，加入ph7.0的磷酸缓冲溶液，浸泡2小时后抽滤，并用磷酸缓冲溶液洗涤，直至滤液ph保持至7.0。
3.根据权利要求1所述的利用固定化磷脂酶lu@ads-17催化水解制备溶血磷脂的方法，其特征在于，所述的大孔树脂ads-17功能化，具体为：将活化后的大孔树脂加入到乙醇水溶液（体积比为1:1）中，混合均匀后，加入盐酸多巴胺进行搅拌；然后，将20mmol/l三羟甲基氨基甲烷缓冲液逐滴加入，调节ph至8.5后分别搅拌60～90分钟，加入醋酸纤维素，再加入过硫酸铵并在50℃下搅拌30～40分钟后，抽滤，洗涤，即得接枝了醋酸纤维素的聚多巴胺表面修饰大孔树脂，即功能化的大孔树脂ads-17；
4.根据权利要求1所述的利用固定化磷脂酶lu@ads-17催化水解制备溶血磷脂的方法，其特征在于，所述的lu酶固定化具体为：将lu酶液与适量磷酸缓冲溶液（ph=4-8）混合，制成酶磷酸缓冲溶液...
【专利技术属性】
技术研发人员：钟南京，章镪月，林树平，郑佳薇，
申请(专利权)人：广东药科大学，
类型：发明
国别省市：
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