基于人工优化cDNA的几丁质内切酶及其基因、制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种基于人工优化cDNA的高表达变色栓菌几丁质内切酶的基因、重组载体、重组菌、重组酶及其制备方法，将优化的变色栓菌几丁质内切酶基因如SEQ ID NO.1所示的序列构建至毕赤酵母表达载体中，再转化至毕赤酵母表达菌株中，经高Zeocin抗性的YPD平板筛选得到表达活性变色栓菌几丁质内切酶的重组菌，进一步从高Zeocin抗性的转化子筛选高表达的毕赤酵母转化子，最后在生物反应器中进行发酵，所得上清液中含有大量的重组活性变色栓菌几丁质内切酶，高密度发酵条件下，重组变色栓菌几丁质内切酶的表达水平达3.1g/L，经硫酸氨分级沉淀及离子交换，高效纯化了该变色栓菌几丁质内切酶。该重组酶能将胶体几丁质水解产生几丁质寡糖，在制备功能性低聚壳寡糖、抗菌与抗肿瘤、农业与生物防治、环保与工业催化等方面具有重要应用价值和广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程，具体涉及一种基于人工优化cdna的几丁质内切酶及其基因、制备方法和应用。

技术介绍

1、几丁质是一种由β-1,4糖苷键连接的n-乙酰葡萄糖胺聚合物，是自然界中仅次于纤维素的第二大可再生资源，广泛分布于甲壳类动物外壳、真菌细胞壁及昆虫外骨骼之中。几丁质内切酶(endochitinase，ec 3.2.1.14)作为特异性水解几丁质内部β-1,4糖苷键的酶类，在生物降解、工业生产及生物防治领域展现出重要价值。此类酶广泛存在于自然界，主要源自微生物、植物、昆虫及节肢动物等。近年来，利用宏基因组技术从极端环境(例如深海、极地)中挖掘新型耐极端条件的内切酶基因已成为研究热点。

2、几丁质内切酶的应用价值主要体现在以下几个方面：(1)抗真菌剂：通过降解病原真菌(如灰霉病菌、稻瘟病菌)细胞壁中的几丁质，有效抑制其生长。例如，木霉(trichoderma harzianum)产生的内切酶已被应用于生物农药的开发；(2)促进植物免疫：能够诱导植物系统抗性，提升作物抗病能力；

3、(3)壳寡糖制备：利用酶法降解几丁质生产壳寡糖，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于人工优化cDNA的高表达变色栓菌几丁质内切酶基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.如权利要求1所述的基因编码得到的重组变色栓菌几丁质内切酶，其特征在于，所述酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.含有权利要求1所述的基因的生物材料，其特征在于，所述生物材料包括重组表达载体、表达盒或重组菌。

4.如权利要求3所述的生物材料，其特征在于，所述重组表达载体由空载体和插入所述空载体的权利要求1所述的基因组成，所述空载体为组成型表达载体。

5.如权利要求4所述的生物材料，其特征在于，所述组成型...

【技术特征摘要】

1.一种基于人工优化cdna的高表达变色栓菌几丁质内切酶基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。

2.如权利要求1所述的基因编码得到的重组变色栓菌几丁质内切酶，其特征在于，所述酶的氨基酸序列如seq id no.2所示。

3.含有权利要求1所述的基因的生物材料，其特征在于，所述生物材料包括重组表达载体、表达盒或重组菌。

4.如权利要求3所述的生物材料，其特征在于，所述重组表达载体由空载体和插入所述空载体的权利要求1所述的基因组成，所述空载体为组成型表达载体。

5.如权利要求4所述的生物材料，其特征在于，所述组成型表达载体为pgapzb。

6.一种重组变色栓菌几丁质内切酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤4)中，发酵为包括在28℃继续培养72-96小时并自动补加50％的甘油作为碳源，甘油补加...

【专利技术属性】
技术研发人员：李洪波，燕文灵，张洪瑞，
申请(专利权)人：湖南医药学院，
类型：发明
国别省市：