一种人血浆神经源性外泌体和总外泌体及其分离方法技术

本发明专利技术公开了一种人血浆神经源性外泌体和总外泌体及其分离方法，人血浆神经源性外泌体的分离方法包括如下步骤：步骤A、取链霉亲和素磁珠，用0.005％‑0.05％Tween20‑DPBS清洗，再用BSA‑DPBS重悬，获得重悬液Ⅰ；步骤B、往重悬液Ⅰ中加入生物素化NCAM抗体，孵育、清洗、重悬后得重悬液II；步骤C、重悬液II与血浆总外泌体混合，于4℃条件下孵育；步骤D、去上清，用DPBS洗涤、洗脱，中和后获得人血浆神经源性外泌体。本发明专利技术的人血浆神经源性外泌体的分离方法能够获得杂质较少、形态结构更完整的神经源性外泌体。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体地说，涉及一种人血浆神经源性外泌体和总外泌体及其分离方法。

技术介绍

1、外泌体是一种具有完整双层膜结构的细胞外囊泡,其直径为30～200nm,可携带多种类型细胞释放的蛋白质、核糖核酸和脂质。外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。

2、在大脑中，外泌体参与突触可塑性、神经元应激反应、细胞间通信和神经发生等过程。外泌体可以穿过血-脑脊液屏障，且含量随其分泌和受体细胞的不同而变化，可以作为神经功能障碍的生物标志物。中枢神经系统的细胞间通讯在大脑生长、发育和内稳态的维持方面发挥重要作用，研究神经源性外泌体可以为疾病诊断和治疗干预提供信息。

3、研究外泌体调控人体生理机能的前提是分离提取出高质量的外泌体。目前，分离外泌体的方法有超速离心法、聚合物沉淀法、免疫亲和力法等。

4、目前，在分离人血浆神经源性外泌体时，会因为免疫捕获时使用的磁珠发生非特异性结合导致分离出来的人血浆神经源性外泌体混杂较多其他细胞来源的外泌体，免疫捕获后的外泌体洗脱和中和不完善也会导致获得的神经源性外泌体的形态本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种人血浆神经源性外泌体的分离方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的人血浆神经源性外泌体的分离方法，其特征在于，步骤A中用于清洗链霉亲和素磁珠的Tween 20-DPBS的质量分数为0.01％。

3.如权利要求1或2所述的人血浆神经源性外泌体的分离方法，其特征在于，步骤D中洗脱时室温孵育10min。

4.如权利要求1或2所述的人血浆神经源性外泌体的分离方法，其特征在于，步骤D中用Glycine-HCl洗脱，用Tris-HCl中和。

5.如权利要求4所述的人血浆神经源性外泌体的分离方法，其特征在于，所述Glycine-H...

【技术特征摘要】

1.一种人血浆神经源性外泌体的分离方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的人血浆神经源性外泌体的分离方法，其特征在于，步骤a中用于清洗链霉亲和素磁珠的tween 20-dpbs的质量分数为0.01％。

3.如权利要求1或2所述的人血浆神经源性外泌体的分离方法，其特征在于，步骤d中洗脱时室温孵育10min。

4.如权利要求1或2所述的人血浆神经源性外泌体的分离方法，其特征在于，步骤d中用glycine-hcl洗脱，用tris-hcl中和。

5.如权利要求4所述的人血浆神经源性外泌体的分离方法，其特征在于，所述glycine-hcl浓度为0.5m，ph值为3.0，和/或，所述tris-hcl浓度为1m，ph值为8.0。

6.如权利要求1所述的人血浆神经源性外泌体的分离方法，其特征在于，步骤b中加入生物素化ncam抗体后在室温下孵育1h。

7.如权利要求1所述的人血浆神经源性外泌体的分离方法，其特征在于，步骤c的重悬液ii与血浆总外泌体混合后于4℃条件下孵育16-18h。

8.如权利要求1所述的人血浆神经源性外泌体的分离方法，其特征在于，所述步骤c的血浆总外泌体，其是采用如下方法制备获得：

9.如权利要求8所述的人血浆神经源性外泌体的分离方法，其特征在于，所述外泌体沉淀剂中包含peg和nacl，向血浆中加入外泌体沉淀剂时，所述血浆...

【专利技术属性】
技术研发人员：任斌，周玉强，于畅，方彬，刘佳麟，
申请(专利权)人：上海恩元生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：