一种猪肠道冠状病毒多重ddPCR检测方法技术

本发明专利技术涉及生物检测技术领域，其涉及一种猪肠道冠状病毒多重ddPCR检测方法，具体涉及到饲料、动物组织和动物源产制品等猪肠道冠状病毒含量较低或基质复杂样品的监测和定量检测方法。本发明专利技术中建立的猪肠道冠状病毒微滴数字PCR检测方法，特异性强、敏感度高、重复性好、抗干扰能力强，可对实际样本中的猪急性腹泻综合征冠状病毒（SADS‑CoV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）和猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）拷贝浓度进行绝对定量，为四种猪肠道冠状病毒感染早期的痕量预警监测、与其他常见病毒鉴别诊断、研究其传播规律以及流行病学风险评估等系统性应用提供新的可靠的技术方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学检测，具体涉及一种用于同时检测猪急性腹泻综合征冠状病毒（sads-cov）、猪流行性腹泻病毒（pedv）、猪德尔塔冠状病毒（pdcov）和猪传染性胃肠炎病毒（tgev）的多重数字pcr（ddpcr）检测方法，涉及到饲料、动物组织和动物源产制品等猪肠道冠状病毒含量较低或基质复杂样品的监测和定量检测方法。

技术介绍

1、猪肠道冠状病毒，如sads-cov、pedv、pdcov和tgev，是引起猪病毒性腹泻综合征（vds）的主要病原体，给养猪业带来重大经济损失。这些病毒感染仔猪后会引发严重症状，如急性腹泻、呕吐、脱水甚至死亡，致死率较高。而且它们在全球多地频繁暴发，传播范围广，并且容易发生变异和重组，增加了防控难度。由于这些病毒临床症状相似，难以通过症状进行准确区分，因此需要精准的检测方法来鉴别诊断。

2、目前临床上常用的病原体检测方法在检测猪肠道冠状病毒时存在诸多缺陷。例如传统检测方法操作繁琐、检测周期长，无法满足快速诊断的需求；部分方法灵敏度和特异性不足，容易出现漏检或误检的情况，难以准确检测出低浓度病毒样本。同时，对于多本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.猪肠道冠状病毒SADS-CoV N基因靶标、PEDV N基因靶标、PDCoV M基因靶标和TGEV S基因靶标在制备猪肠道冠状病毒检测试剂中的应用，其特征在于，所述猪肠道冠状病毒SADS-CoV N基因靶标、PEDV N基因靶标、PDCoV M基因靶标和TGEV S基因靶标的核苷酸序列如SEQ ID NO.1- SEQ ID NO.4所示。

2.一种检测权利要求1所述的猪肠道冠状病毒SADS-CoV N基因靶标、PEDV N基因靶标、PDCoV M基因靶标和TGEV S基因靶标的引物组及探针。

3.根据权利要求2所述的引物组及探针，其特征在于，所述包含引物组及...

【技术特征摘要】

1.猪肠道冠状病毒sads-cov n基因靶标、pedv n基因靶标、pdcov m基因靶标和tgev s基因靶标在制备猪肠道冠状病毒检测试剂中的应用，其特征在于，所述猪肠道冠状病毒sads-cov n基因靶标、pedv n基因靶标、pdcov m基因靶标和tgev s基因靶标的核苷酸序列如seq id no.1- seq id no.4所示。

2.一种检测权利要求1所述的猪肠道冠状病毒sads-cov n基因靶标、pedv n基因靶标、pdcov m基因靶标和tgev s基因靶标的引物组及探针。

3.根据权利要求2所述的引物组及探针，其特征在于，所述包含引物组及探针的核苷酸序列如下所示：

4.一种包含权利要求2或3所述的引物组及探针的试剂盒。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，sads-cov引物终浓度500 nmol/l，pedv引物终浓度700 nmol/l，pdcov引物终浓度500 nmol/l，tgev引物终浓度为600 nmol/l，sads-cov、pedv、pdcov和tgev探针终浓度均为250 nmol/l。

6.根据权利要求4所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：帅江冰，张晓峰，韩笑，孔朋莉，金晨晨，
申请(专利权)人：浙江省检验检疫科学技术研究院，
类型：发明
国别省市：