制备粘蛋白的方法、粘蛋白、抗菌组合物、药物递送系统及其应用技术方案

本发明专利技术公开了制备粘蛋白的方法、粘蛋白、抗菌组合物、药物递送系统及其应用。所述方法包括：1)收集动物的粘液，其中所述粘液中含有粘蛋白；2)将所述粘液与稀释液混合，使粘液被稀释并均质化；其中所述稀释液包含盐浓度为20‑190mM的缓冲液；3)将步骤2)所得混合液进行筛网过滤，所用筛网的孔径为100μm‑1mm；4)将过滤所得液体在碱性缓冲液中进行透析，然后用超纯水或去离子水进行透析，从而得到粘蛋白。所述方法步骤简单、条件温和，所得粘蛋白保留了pH响应性、抑制细菌生长、破坏细菌生物膜等天然生物活性，分子量远大于商业来源的粘蛋白，可被进一步加工为高级生物材料，发挥抑制细菌生长的作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于工程材料和分子生物学领域，具体而言，涉及制备粘蛋白的方法、粘蛋白、抗菌组合物、药物递送系统及其应用。

技术介绍

1、用于皮肤粘膜和伤口护理的传统敷料，如纱布、薄膜、泡沫、水凝胶(如海藻酸盐、壳聚糖和胶原)和亲水性胶体，都有一些缺点，如需要创伤和机械清创、导致血管收缩和组织缺氧、具有细胞毒性、产生大量渗出物、易受酶降解、频繁更换、闭塞性和易受细菌污染。

2、如抗菌剂化合物等生物活性和功能性成分被用来克服这些问题。其中一些生物活性敷料含有天然聚合物，如海藻酸盐、壳聚糖和胶原，据报道，它们可以促进组织再生。此外，抗菌肽已被纳入敷料和乳膏中，目前正在进行几项临床试验。具有抗菌性能的载药敷料已经得到了广泛的开发，产生了多种市售可得的产品，包括纱布、泡沫、亲水性胶体和水凝胶。这些敷料含有银离子作为抗菌剂，一些品牌提供此类产品。虽然银离子的使用是一个活跃的研究领域，然而人们担心其细胞毒性作用，并且银离子的体内释放率的结果还存在争议。此外，碘在伤口敷料中的应用尚未完全成熟，因为碘伏(如聚维酮碘)的安全性和作用方式仍不清楚。抗生素(如环丙沙星和链霉本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种制备粘蛋白的方法，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤2)所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、4-吗啉乙磺酸缓冲液(MES)、2-[4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基]乙磺酸缓冲液(HEPES)、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液(Tris-HCL)和3-吗啉丙磺酸缓冲液(MOPS)，并且所述缓冲液中还额外包含金属盐，使得所述缓冲液的总盐浓度为20-190mM；所述金属盐选自钠盐、钾盐、镁盐和钙盐。

3.根据权利要求1所述的方法，其中步骤2)所述缓冲液为10-20mM的磷酸盐缓冲液，并且其中还额外包含10-170mM的金属盐；优选地，所述磷酸盐缓冲液选自磷...

【技术特征摘要】

1.一种制备粘蛋白的方法，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤2)所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、4-吗啉乙磺酸缓冲液(mes)、2-[4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基]乙磺酸缓冲液(hepes)、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液(tris-hcl)和3-吗啉丙磺酸缓冲液(mops)，并且所述缓冲液中还额外包含金属盐，使得所述缓冲液的总盐浓度为20-190mm；所述金属盐选自钠盐、钾盐、镁盐和钙盐。

3.根据权利要求1所述的方法，其中步骤2)所述缓冲液为10-20mm的磷酸盐缓冲液，并且其中还额外包含10-170mm的金属盐；优选地，所述磷酸盐缓冲液选自磷酸钠缓冲液、磷酸钾缓冲液、磷酸镁缓冲液和磷酸钙缓冲液，所述金属盐选自钠盐、钾盐、镁盐和钙盐。

4.根据权利要求1所述的方法，其中步骤2)所述缓冲液的ph为小于或等于7；例如，ph值为6以下。

5.根据权利要求1所述的方法，其中步骤2)所述稀释液还包含杀微生物剂和/或防腐剂；优选地，所述杀微生物剂和/或防腐剂包括2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮和5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮；优选地，所述杀微生物剂和/或防腐剂在所述稀释液中的浓度为0.05％(v/v)-0.1％(v/v)。

6.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤2)中，所述粘液被所述稀释液稀释5倍；优选地，所述混合在1-10℃下进行8-48小时。

7.根据权利要求1所述的方法，其中步骤3)所述筛网过滤在ph 8-10下进行，或者在ph12-13下进行。

8.根据权利要求1所述的方法，其中步骤3)所述筛网过滤在额外含有170mm-200mm金属盐的5-12mm缓冲液中进行；优选地，该缓冲液选自磷酸盐缓冲液、4-吗啉乙磺酸缓冲液(mes)、2-[4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基]乙磺酸缓冲液(hepes)、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液(tris-hcl)和3-吗啉丙磺酸缓冲液(mops)；优选地，所述金属盐选自钠盐、钾盐、镁盐和钙盐。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述缓冲液还包含杀微生物剂和/或防腐剂；优选地，所述杀微生物剂和/或防腐剂包括2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮和5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮；优选地，所述杀微生物剂和/或防腐剂在所述缓冲液中的浓度为0.05％(v/v)-0.1％(v/v)。

10.根据权利要求1所述的方法，其中步骤3)所述筛网过滤至少进行两次，第一次过滤所用第一筛网的孔径为200μm-1mm，第二次过滤所用第二筛网的孔径为100-500μm，且第一筛网的孔径大于第二筛网的孔径。

11.根据权利要求1所述的方法，其中步骤4)所述缓冲液的盐浓度为50mm-200mm；优选地，步骤4)所述缓冲液选自碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液、氢氧化铵-氯化铵缓冲液，三羟甲基胺基甲烷-乙二胺四乙酸缓冲液。

12.根据权利要求1所述的方法，其中步骤4)所述缓冲液的ph值为8-10或者ph 12-13。

13.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤4)中，用截止分子量为14-100kda的透析装置进行所述透析。

14.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤4)中，所述透析包...

【专利技术属性】
技术研发人员：邢怡铭，冯献真，
申请(专利权)人：香港科技大学，
类型：发明
国别省市：