一种新型Kdo-MPLA佐剂制造技术

本发明专利技术公开了一种新型Kdo‑MPLA佐剂，涉及合成生物学技术领域，本发明专利技术中的佐剂由单磷酸脂质A（MPLA）与Kdo糖通过α‑糖苷键连接组成，MPLA为沙门氏菌脂质A经4'位单磷酸化修饰的结构，Kdo糖赋予两亲性，使其在水溶液中自组装为脂质体纳米颗粒；通过基因编辑沙门氏菌减毒株双敲除rfaC和eptA基因：rfaC敲除阻断LPS核心多糖合成，保留脂质A‑Kdo连接；eptA敲除获得单磷酸化脂质A；工程菌经发酵后，采用苯酚‑氯仿‑石油醚提取法获得高纯度Kdo‑MPLA，工艺简化且产物均一；该佐剂可激活TLR4信号通路，诱导Th1型免疫应答，炎症因子IL‑6、IL‑1β水平显著低于天然LPS，适用于HPV、疟疾等疫苗抗原的混合制剂；本发明专利技术克服传统MPLA化学提取工艺的水解不可控性及化学合成高成本缺陷。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及合成生物学，特别是一种新型kdo-mpla佐剂。

技术介绍

1、单磷酰脂质a（monophosphosphoryl lipid a, mpla）一种源自沙门氏菌（slamonella）脂多糖衍生物，有较强的免疫刺激活性和较弱的毒性，广泛用于疫苗佐剂。mpla是细菌内毒素脂多糖lps分子的一个结构组件，是革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分，由三部分组成：o-抗原，核心糖和脂质a。早期研究发现lps能引起发热、休克等强烈免疫反应，因此将lps称为内毒素。人们在研究沙门氏菌时发现沙门氏菌的lps具有免疫原性，可诱导抗体产生，进一步纯化lps证明其毒性主要来源于脂质a部分。解析脂质a的精确结构发现，沙门氏菌的脂质a由一个二糖骨架葡萄糖胺和多个脂肪酸链组成，毒性依赖于磷酸化程度和脂肪酸结构与位置。

2、1984年edgar ribi团队发现通过弱酸水解或酶处理lps可以去除一个磷酸基团，获得单磷酰脂质a，即mpla，毒性显著降低，但是仍能保留免疫刺激能力。1985年david等证明mpla能激活巨噬细胞，诱导细胞因子（tnf-α、il-6、il-本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种新型Kdo-MPLA佐剂，其特征在于，所述佐剂为MPLA与Kdo糖的复合物，其疏水部分为单磷酸脂质A，MPLA，亲水部分为3-脱氧-D-甘露-辛酮糖酸Kdo糖；所述MPLA的结构为沙门氏菌来源的脂质A在1位羟基和4'位单磷酸化的形式，且所述Kdo糖通过α-糖苷键连接至MPLA的6'位羟基；所述Kdo-MPLA具有两亲性，溶于水后形成脂质体纳米颗粒。

2.如权利要求1所述的一种新型Kdo-MPLA佐剂，其特征在于，所述Kdo糖为3-脱氧-D甘露-辛酮糖酸，Kdo，所述MPLA与Kdo糖的连接通过基因编辑沙门氏菌的LPS合成通路实现，且所述沙门氏菌的rfaC基因和eptA...

【技术特征摘要】

1.一种新型kdo-mpla佐剂，其特征在于，所述佐剂为mpla与kdo糖的复合物，其疏水部分为单磷酸脂质a，mpla，亲水部分为3-脱氧-d-甘露-辛酮糖酸kdo糖；所述mpla的结构为沙门氏菌来源的脂质a在1位羟基和4'位单磷酸化的形式，且所述kdo糖通过α-糖苷键连接至mpla的6'位羟基；所述kdo-mpla具有两亲性，溶于水后形成脂质体纳米颗粒。

2.如权利要求1所述的一种新型kdo-mpla佐剂，其特征在于，所述kdo糖为3-脱氧-d甘露-辛酮糖酸，kdo，所述mpla与kdo糖的连接通过基因编辑沙门氏菌的lps合成通路实现，且所述沙门氏菌的rfac基因和epta基因被敲除。

3.如权利要求2所述的一种新型kdo-mpla佐剂，其特征在于，所述沙门氏菌为减毒株。

4.一种新型kdo-mpla佐剂的制备方法，基于权利要求1~3任一所述的一种新型kdo-mpla佐剂，其特征在于，包括以下步骤：

5.如权利要求4所述的一种新型kdo-mpla佐剂的制备方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：高正伦，陈凯，马正群，
申请(专利权)人：北京绿竹生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：