【技术实现步骤摘要】
本专利技术总体上涉及免疫学和医学领域。更具体地，它涉及t细胞受体(tcr)。在某些实施方案中，所述tcr可以用于治疗癌症。
技术介绍
1、基于t细胞的治疗已经显示出作为用于治疗许多癌症的方法的显著前景；遗憾的是，该方案也已经受到针对常见癌症的免疫原性抗原靶标的缺乏和对非癌组织的潜在毒性的阻碍。这些基于t细胞的治疗可以包括过继性细胞转移(act)和疫苗接种方案。act通常涉及将大量的自体活化的肿瘤特异性t细胞输注到患者中，例如以治疗癌症。act已经在黑素瘤患者中引起治疗性临床应答(yee,2002；dudley,2002；yee,2014)。一般而言，为了产生有效的抗肿瘤t细胞应答，通常需要以下三个步骤：使抗原特异性t细胞致敏并活化，使活化的t细胞迁移至肿瘤部位，以及通过抗原特异性t细胞来识别并杀死肿瘤。靶抗原的选择对于有效的抗原特异性t细胞的诱导是重要的。
2、虽然已经鉴定了黑素瘤和少数其它实体瘤恶性肿瘤的数种肿瘤相关抗原，但是对于胰腺癌、卵巢癌、胃癌、肺癌、宫颈癌、乳腺癌和头颈癌的免疫原性靶标很少。鉴定和验证这些常见的和难以治疗的恶性肿瘤的新表位和靶抗原是有必要的。
技术实现思路
1、在某些实施方案中，本公开内容提供了一种经工程改造的t细胞受体(tcr)，其包含α链cdr3和/或β链cdr3，所述α链cdr3与seq id no:5、15、25、35或45的氨基酸序列具有至少90％、诸如91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同
2、在某些方面，所述tcr包含与seq id no:2、12、22、32或42的氨基酸序列具有至少90％、诸如91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的α链可变区和/或与seq id no:7、17、27、37或47的氨基酸序列具有至少90％、诸如91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的β链可变区。在特定方面，所述tcr包含seq id no:2、12、22、32或42的α链和/或seq id no:7、17、27、37或47的β链。在某些方面，所述tcr可以分别包含seq id no:2和7、12和17、22和27、32和37或42和47的α链和β链。在特定方面，所述tcr可以具有在α链和/或β链的可变区的序列中的变异，同时保持cdr区域的序列恒定。
3、在某些方面，所述tcr包含与seq id no:1、11、21、31或41的核苷酸序列具有至少90％、诸如91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的α链和/或与seq id no:6、16、26、36或46的核苷酸序列具有至少90％、诸如91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的β链。在具体方面，所述tcr包含含有seq idno:1、11、21、31或41的核苷酸序列的α链和/或含有seq id no:6、16、26、36或46的核苷酸序列的β链。
4、在某些方面，所述tcr进一步定义为可溶性tcr，其中所述可溶性tcr不包含跨膜结构域。
5、在某些方面，所述tcr进一步包含可检测标记。在某些方面，所述tcr共价地结合治疗剂。在具体方面，所述治疗剂是免疫毒素或化学治疗剂。
6、本文进一步提供了多价tcr复合物，其包含多个所述实施方案的tcr。在某些方面，所述多价tcr包含2、3、4或更多个彼此结合的tcr。在特定方面，所述多价tcr存在于脂质双层中、脂质体中或连接至纳米颗粒。在某些方面，所述tcr经由接头分子彼此结合。
7、在另一个实施方案中，提供了一种编码所述实施方案的tcr的多肽。本文还提供了编码所述实施方案的多肽的多核苷酸。
8、其它实施方案提供了编码所述实施方案的tcr的表达载体。在某些方面，编码tcr的序列是在启动子的控制下。在特定方面，所述表达载体是病毒载体。在一个具体方面，所述病毒载体是逆转录病毒载体。在某些方面，所述载体进一步编码接头结构域。在某些方面，所述接头结构域位于α链和β链之间。在某些方面，所述接头结构域包含一个或多个切割位点。在某些方面，所述一个或多个切割位点是弗林蛋白酶切割位点和/或p2a切割位点。在某些方面，所述弗林蛋白酶切割位点是rakr。在其它方面，所述弗林蛋白酶切割位点是atnfsllkqagdveenpg(seq id no:51)。在某些方面，所述一个或多个切割位点被间隔物隔开。在具体方面，所述间隔物是sgsg或gsg。
9、在另一个实施方案中，提供了一种宿主细胞，其被工程改造成表达所述实施方案的tcr。在某些方面，所述细胞是t细胞、nk细胞、恒定型nk细胞、nkt细胞、间质干细胞(msc)或诱导的多能干(ips)细胞。在某些方面，所述宿主细胞是免疫细胞。在特定方面，所述宿主细胞分离自脐带。在某些方面，所述t细胞是cd8+t细胞、cd4+t细胞或γδt细胞。在特定方面，所述t细胞是调节性t细胞(treg)。在某些方面，所述细胞是自体的。在特定方面，所述细胞是同种异体的。
10、另一个实施方案提供了一种工程改造所述实施方案的宿主细胞的方法，所述方法包括使所述免疫细胞与所述实施方案的tcr或所述实施方案的表达载体接触。在某些方面，所述免疫细胞是t细胞或外周血淋巴细胞。在某些方面，将接触进一步定义为转染或转导。在某些方面，转染包括将编码所述实施方案的tcr的rna电穿孔进免疫细胞中。
11、在另外方面，所述方法还包括，在转导所述免疫细胞之前，从编码所述实施方案的tcr的表达载体产生病毒上清液。
12、在某些方面，所述免疫细胞是经刺激的淋巴细胞。在某些方面，所述经刺激的淋巴细胞是人淋巴细胞。在某些方面，刺激包括使免疫细胞与okt3和/或il-2接触或在okt3和/或il-2中孵育免疫细胞。
13、在某些方面，所述方法还包括将免疫细胞分选以分离tcr工程改造的t细胞。在某些方面，所述方法还包括通过系列稀释执行t细胞克隆。在某些方面，所述方法还包括通过快速扩增方案来扩增t细胞克隆。
14、在另一个实本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种经工程改造的T细胞受体(TCR)，其包含：
2.根据权利要求1所述的TCR，其中所述经工程改造的TCR结合HLA-A24。
3.根据权利要求2所述的TCR，其中所述经工程改造的TCR结合HLA-A*2402。
4.根据权利要求1所述的TCR，其中所述TCR包含：
5.根据权利要求1所述的TCR，其中所述TCR包含：
6.根据权利要求4所述的TCR，其中所述TCR包含:
7.根据权利要求4所述的TCR，其中所述TCR包含：
8.根据权利要求1所述的TCR，其中所述TCR进一步定义为可溶性TCR，其中所述可溶性TCR不包含跨膜结构域。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的TCR，其进一步包含可检测标记。
10.根据权利要求1-8中任一项所述的TCR，其中所述TCR共价地结合治疗剂。
11.根据权利要求10所述的TCR，其中所述治疗剂是免疫毒素或化学治疗剂。
12.一种多价TCR复合物，其包含多个根据权利要求1-8中任一项所述的TCR。
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