一种细菌内毒素的检测方法及其应用技术

本发明专利技术属于化学分析检测技术领域，具体提供了一种细菌内毒素的检测方法及其应用。该检测方法为将待测样品、Ag@AuNPs纳米酶、3,3',5,5'‑四甲基联苯胺和过氧化氢混合，然后加入pH 4.0~4.1醋酸钠缓冲溶液静置孵育，通过拉曼光谱仪测定拉曼强度，计算得到待测样中细菌内毒素含量。纳米酶表现出优异的类过氧化物酶及表面增强拉曼散射活性，在H<subgt;2</subgt;O<subgt;2</subgt;存在下，可以氧化无色TMB为蓝色产物oxTMB，带负电荷的细菌内毒素能够通过静电相互作用与带正电纳米酶结合，导致纳米酶催化活性降低，抑制其类过氧化物酶活性，使得纳米酶氧化TMB及H<subgt;2</subgt;O<subgt;2</subgt;体系产生的oxTMB蓝色变浅，从而建立高灵敏、选择性强的检测方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及化学分析检测，尤其涉及一种细菌内毒素的检测方法及其应用。

技术介绍

1、细菌内毒素是革兰阴性菌外膜上的脂多糖（lipopolysaccharide，lps），是引起临床热原不良反应的主要原因，当细菌细胞裂解时，lps释放到环境中。lps分子因含有磷酸基团和羧基而带较高的负电荷。在人体中，革兰氏阴性菌感染可导致化学性质稳定的lps分子在血液中蓄积，易诱发发热、脓毒性休克、败血症、肠道炎症甚至多器官功能衰竭。各国药典均制定了严格的lps限值0.25 eu/ml的注射用水（water for injection，wfi）( eu =内毒素活性的计量单位)，其纯度较高，以免对患者的安全造成不利影响。中国药典规定，注射用lps的最大可接受浓度为5eu/kg/h，鞘内注射lps的最大可接受浓度为0.2eu/kg/h。因此，在生产中实时监测lps含量对保证灭菌产品的安全性具有重要意义。目前，lps的检测方法有体内兔热原试验（rpt）和体外鲎试剂试验（lal），均采用马蹄蟹血细胞水提液，即lal试剂或裂解液试剂。lal试验是应用最广泛的高灵敏度试验，因为它是本文档来自技高网...

【技术保护点】

1. 一种细菌内毒素的检测方法，其特征在于，将待测样品、Ag@AuNPs纳米酶、3,3',5,5'-四甲基联苯胺和过氧化氢混合，然后加入pH 4.0~4.1醋酸钠缓冲溶液静置孵育，通过拉曼光谱仪测定拉曼强度，计算得到待测样中细菌内毒素含量；

2. 如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述AgAu@AuNPs的浓度为1 mg/mL，用量为10~20 μL，TMB的浓度为5 mmol/L，用量为10~20 μL，H2O2的浓度为50 mmol/L，用量为10~20 μL。

3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述静置孵育的温度为35℃~37℃，孵育的时间为...

【技术特征摘要】

1. 一种细菌内毒素的检测方法，其特征在于，将待测样品、ag@aunps纳米酶、3,3',5,5'-四甲基联苯胺和过氧化氢混合，然后加入ph 4.0~4.1醋酸钠缓冲溶液静置孵育，通过拉曼光谱仪测定拉曼强度，计算得到待测样中细菌内毒素含量；

2. 如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述agau@aunps的浓度为1 mg/ml，用量为10~20 μl，tmb的浓度为5 mmol/l，用量为10~20 μl，h2o2的浓度为50 mmol/l，用量为10~20 μl。

3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述静置孵育的温度为35℃~37℃，孵育的时间为10~15min。

4. 如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述拉曼光谱检测的波长范围为650nm~654nm。

5. 如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤s1的制备过程具体为，取0.3~0.5g壳聚糖、0.3~0.5 g柠檬酸、0.20~0.40 g mncl2·4h2o、0.18~0.4 g的fecl3·6h2o和0.15~0.35 g对苯二胺溶解于30~50 ml的 0.05~0.1%（v/v）醋酸溶液，超声处理20~30 min，将该混合溶液转移至聚四氟乙烯高压反应釜中，置于微波消解仪50 w加热至180 ℃反应1~2 h，反应完成后自然...

【专利技术属性】
技术研发人员：向诚，李秋兰，杨德志，杨亚玲，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：