一种利用多个sgRNA获得草地贪夜蛾DDC基因功能缺失个体的方法技术

本发明专利技术属于昆虫基因编辑技术领域，具体涉及一种利用多个sgRNA获得草地贪夜蛾DDC基因功能缺失个体的方法。鉴于目前尚未有关于在草地贪夜蛾中成功敲除DDC基因的研究，本发明专利技术以鳞翅目昆虫草地贪夜蛾为研究对象，并通过CRISPR/Cas9技术，在多巴脱羧酶(DDC)的第五个外显子上设计sgRNA，成功对DDC基因进行敲除得到幼虫突变体，充分验证了使用多sgRNA在草地贪夜蛾中敲除DDC基因的可行性。本发明专利技术构建草地贪夜蛾DDC突变体的方法，有利于破坏昆虫抵御天敌侵害的防御机制，为草地贪夜蛾的绿色防控提供理论和应用基础，具有重要的理论研究价值和实际应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于昆虫基因编辑，具体涉及一种利用多个sgrna获得草地贪夜蛾ddc基因功能缺失个体的方法。

技术介绍

1、昆虫是自然界中物种最丰富的真核生物类群，已被发现的昆虫种类超过100万种。昆虫的形态、生活习性丰富多姿，在食物链中扮演着至关重要的角色。在自然界中，由于昆虫不断暴露于潜在的病原体和寄生虫环境中，容易引发涉及生理、发育和行为变化的免疫反应。为了有效地抵御细菌、真菌、寄生虫、病毒等的侵染，昆虫会快速有效地激活其先天免疫系统，其主要依靠的先天免疫系统包括体液免疫和细胞免疫。其中，体液免疫包括在昆虫血腔中对不同病原物的识别，血淋巴中丝氨酸蛋白酶级联反应的激活，脂肪体被诱导产生并分泌血淋巴效应分子(如抗菌肽等)，黑化反应的激活及其具有抗菌活性的中间产物(如酚氧化酶)。昆虫的体液免疫是依靠提高血淋巴中的免疫物质的浓度而发挥免疫能力。体液免疫因子主要有溶菌酶、酚氧化酶和抗菌肽等。昆虫免疫反应的强弱在体液免疫中体现在溶菌酶和酚氧化酶的活性、抗菌肽的产生和表达等方面。细胞免疫则主要依靠血淋巴中的血细胞对病原微生物和外来入侵物质的吞噬(phagocytosis本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种利用多个sgRNA获得草地贪夜蛾DDC基因功能缺失个体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种利用多个sgRNA获得草地贪夜蛾DDC基因功能缺失个体的方法，其特征在于，S1中所合成的sgRNA包括SEQ ID No:7-10中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的一种利用多个sgRNA获得草地贪夜蛾DDC基因功能缺失个体的方法，其特征在于，S1所述PCR扩增合成sgRNA模板的PCR扩增体系如下：10μL5×PrimeSTARGXLBuffer，4μL dNTP Mixture，2μL上游sgRNA引物，2μL下游sgRNA引物，1...

【技术特征摘要】

1.一种利用多个sgrna获得草地贪夜蛾ddc基因功能缺失个体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种利用多个sgrna获得草地贪夜蛾ddc基因功能缺失个体的方法，其特征在于，s1中所合成的sgrna包括seq id no:7-10中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的一种利用多个sgrna获得草地贪夜蛾ddc基因功能缺失个体的方法，其特征在于，s1所述pcr扩增合成sgrna模板的pcr扩增体系如下：10μl5×primestargxlbuffer，4μl dntp mixture，2μl上游sgrna引物，2μl下游sgrna引物，1μl primestargxl dnapolymerase，31μl ddh2o。

4.根据权利要求3所述的一种利用多个sgrna获得草地贪夜蛾ddc基因功能缺失个体的方法，其特征在于，所述上游sgrna引物如seq id no:13或seq id no:14或seq id no:15或seq id no:16所示，所述下游sgrna引物如seq id no:17所示。

5.根据权利要求1所述的一种利用多个sgrna获得草地贪夜蛾ddc基因功能缺失个体的方法，其特征在于，s1所述pcr扩增合成sgrna模板的pc...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱冠恒，黄上欢，李慎磊，
申请(专利权)人：中山大学·深圳，
类型：发明
国别省市：