用于口腔卫生保健的天然多肽制造技术

本发明专利技术总地说来涉及牙疾病、龋病（ｃａｒｉｅｓ）和牙周病。更具体地，本发明专利技术涉及乳铁蛋白（ｌａｃｔｏｆｅｒｒｉｎ）和富酪蛋白（ｓｔａｔｈｅｒｉｎ）融合蛋白（ＳＴＡＴ－ＬＦ）以及此类多肽的治疗性、诊断性和研究性用途。本发明专利技术还提供了治疗牙疾病、龋病和牙周病的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于口腔卫生保健的天然多肽 优选权的要求本申请要求2007年1月16日提交的美国临时申请号60/880， 753 的优先权，该申请的^^开内容以其全文通过引用合并入本文。
技术介绍
多年来，研究者一直试图开发可用于抵抗口腔中的感染的化学治 疗剂。早在20世纪40年代中期，随着抗生素的引入，人们开始明白， 虽然这些有力的试剂可能是有效的，但口腔的独特性问题干扰了它们 的用途。随着时间的推移，对口腔中菌斑的产生理解更深。随着理解 的加深，人们开始明白，递送至口腔的试剂需要附着至口腔组织以抵 抗唾液流动和口部咀嚼的力量引起的去除。被广为接受的是，为了使 抗微生物剂在口腔中有效，需要将该试剂在该环境中保持一段时间。 说明该原理的一个实验比较了两个著名的抗微生物剂四环素和青霉素 的功效。经显示当在体外进行检测时，与四环素相比，青霉素是更有 效的试剂。同样，显示当在肉汤培养基中进行抗细菌生长的检测时， 与四环素相比，青霉素在显著更低的浓度上有效地抗口腔细菌(1 ug/ml (对于青霉素)对10-20 ug/ml (对于四环素))。此外，青霉 素是杀菌剂，从而促进杀死细菌，然而四环素是抑菌剂，从而减緩细 菌的生长和发育。然而，尽管功效上存在这些显著的差异，但经证明 当局部应用于口腔时四环素是更有效的抗微生物剂。因此，当向涂覆 有唾液的羟基磷灰石盘(SHA)(牙/釉质表面的替代品)加入四环素， 然后清洗该四环素处理的SHA牙齿类似物，并将其置于细菌的培养物 中时，看到此类生物极少能够粘附至SHA。另一方面，当以相似的方 式用青霉素处理SHA时，没有效果。因此，尽管当与青霉素相比时四 环素的功效较低，但四环素在解释药物粘附和从涂覆有唾液的牙齿类似物释》文的测定中更优。因为两种最常见的牙病，龋病(caries)和牙 周病由粘附至牙齿表面的口腔细菌引起，所以口腔中抗微生物功效的 检测需要集中在预防或减少细菌粘附至牙齿表面的方法上。基于该理解，20世纪60年代后期和70年代早期的研究检查了具 有直接性(substantivity )的特征(试剂结合牙齿样表面并从其释i文 的能力)的试剂。已研究的具有该特征的首批试剂中的一个是氯己定 (双缩二胍(bisbiguanide)抗樣l生物剂)，其在体外和体内都显示减少 菌斑至牙齿的附着。研究称为Peridex⑧和Perioguard⑧的试剂，其为 目前可商购获得的已进行过检测并且显示结合口腔组织的口腔清洗 剂。当用于临床研究时，与抗微生物活性组合的该直接性的特性导致 龈炎和龋病水平的降低。自那时以来，已进行许多努力以开发在口腔 中有效作用的试剂。迄今临床试验已显示极少成功例子。 一个这样的 成功例子利用了试剂三氯生(triclosan) ， Colgate Total⑧牙膏中 的活性成分。该洁牙剂经试验证明足以获得联邦机构例如ADA和FDA 的认可。商购可获得的含有三氯生的洁牙剂由Colgate Palmolive公 司提供。通过采用已知的抗微生物剂三氯生(酚类化合物)(其已用 于洗发剂和除臭剂中)，并且将其连接至允许其结合至口腔组织的试 剂开发了全效牙膏(Total toothpaste )。三个主要的工业公司Procter and Gamble/Unilever以及Colgate Palmolive/>司几乎同时将三氯 生作为在口腔中可能有效的试剂进行开发。各公司具有其自己的策略，所述策略设计用于使活性剂三氯生结合至口腔组织以使其可有效地抗 结合牙齿的口腔微生物。要重申的是，三氯生本身不能结合口腔组织， 从而尽管其具有有效的抗微生物特性但其在口腔中是无效的。Colgate Palmolive 7>司将igicare或gantrex与三氯生混合，从而形成聚合 化合物，该化合物，当递送至口腔时，以使三氯生有效的方式结合。 该组合产品，除了包含氯己定的产品外，和其他包含酚类化合物的试 剂是过去40年中开发的最好的有效试剂之一。龋病是最常见的慢性儿童期疾病，其频繁程度比哮喘高5倍。17 岁以上的儿童中超过70%具有蛀洞。超过1亿8百万美国人缺少牙齿健康保险，从而缺少该感染的治疗。变异链球菌(又迈W"/7S)被认为是 与蛀牙相关程度最高的微生物之一。在患有局限型青少年牙周炎(现称为局限型侵袭性牙周炎(Localized Aggressive Periodontitis )) 的儿童的研究中， 一个申请者发现这些儿童中有许多具有最小程度的 牙蛀蚀。此外，这些研究发现，患有该形式的牙周病的儿童具有唾液 蛋白乳铁蛋白(lactoferrin) (Lf)的变体。当该Lf变体(赖氨酸变 体)在昆虫载体中表达并且对其进行检测时，发现其杀死变异链球菌。 相反，存在于健康的非牙周病儿童中的另一种更常见的Lf变体(精氨 酸变体)对变异链球菌的存活影响极小或无影响。近来，我们已显示具有该乳铁蛋白的赖氨酸形式的合成肽杀死变 异链球菌。其他研究人员已显示乳铁蛋白肽具有抗微生物活性，但迄 今为止没有人显示来源于该肽的抗菌活性可用于抗口腔中的生物。我 们也已证明该肽在口腔中具有有限的有效性，除非将其连接至将允许 该肽结合至牙齿表面的某些物质。因此，我们已开发了融合肽，其中 将活性肽连接至小唾液肽富酪蛋白(statherin),这样其可保持其抗微 生物活性，同时也可保留在牙齿表面以减少变异链球菌对该表面的结 合。乳铁蛋白(Lf)是在乳房分泌物、泪液和唾液以及在胃肠道中发现 的多功能蛋白质。其主要功能是将铁与其周围环境隔离以阻止口腔微 生物获得得铁(微生物存活所必需的矿物质)。此外，在其N端中， Lf拥有具有抗^L生物特性的区域。该区域称为防卫素(defensin)区 域，并且自20世纪80年代以来已显示Lf可杀死许多类型的细菌，包 括口腔细菌。还显示，在该N端区域，从氨基酸位置11至31存在至 少2个多态性形式。对于该防卫素区域中的大部分变异，在氨基酸位 置29可包含精氨酸或赖氨酸。近至1998年，已显示氨基酸位置29 中的这2种变体具有不同的抗微生物活性，并且经设计具有此类形式 的肽可具有抗微生物活性。事实上，我们的小组在2003年产生了由昆 虫细胞分泌的全长乳铁蛋白。产生具有2种多态性形式(赖氨酸和精氨 酸)的该昆虫细胞分泌的乳铁蛋白并且其通过杆状病毒载体导入。分泌的蛋白质具有人乳铁蛋白的所有特征性质，并且我们就抗革兰氏阳性 和革兰氏阴性生物的活性检测了这两种形式。我们发现赖氨酸形式更 有效地抗一 系列革兰氏阳性和革兰氏阴性生物，特别地更有效地抗变 异链球菌(公认的龋齿的原因)。因为更频繁地在患有局限型侵袭性牙周炎(LAP)(其中儿童具有比他们的匹配对照更少的龋病的疾病)的 患者中发现Lf的赖氨酸形式，我们推测乳铁蛋白的该赖氨酸形式可对 这些儿童提供生态学有利方面，所述生态学有利方面可解释在这些儿 童中看到的龋病的减少。然后我们进一步确定，除非纯乳铁蛋白连接 至允许其结合牙齿表面的某种物质上，否则其将在口腔中具有有限的 有用性。富酪蛋白是在唾液中发现的小唾液磷蛋白，其在受刺激的唾 液中的浓度为200 ug/mi，但在未受刺激的唾液中浓度低大约10倍。 唾液蛋白至釉质的吸附形成了釉质的薄膜涂层本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于抑制口腔中细菌生长的包含融合蛋白的组合物，所述融合蛋白包含：　ｉ．乳铁蛋白多肽的赖氨酸形式或其功能等同的肽分子；和　ｉｉ．富酪蛋白多肽或其功能等同的肽分子。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：D菲勒，N拉马苏布，
申请(专利权)人：新泽西内科与牙科大学，
类型：发明
国别省市：US[]