一种氨肽酶及其制备方法和应用技术

本申请提供一种氨肽酶及其制备方法和应用，属于生物催化剂技术领域。以含有重组表达载体或基因组中整合有外源的SEQ ID NO：1对应的核酸的大肠杆菌细胞为宿主细胞，使之诱导表达含有序列SEQ ID NO:2的氨肽酶。所得氨肽酶具有酶活性高，酶促反应水平高等优点，可应用于转化底物L‑组氨酸浓度为70g/L，β‑丙氨酸甲酯盐酸盐转化生成L‑肌肽。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及一种氨肽酶及其制备方法和应用，属于生物催化剂。

技术介绍

1、肌肽（l-carnosine，l-car）是由 l-组氨酸和 β-丙氨酸两种氨基酸组成的二肽，在动物体内可以合成，是目前为止发现广泛存在的活性肽之一。

2、目前，l-肌肽的生产方法分为化学合成法和生物合成法。化学合成法是目前工业生产最为常用的方法，大多需要对氨基酸进行保护或去保护，工艺复杂，且副产物多，溶剂消耗较大，环境污染严重。生物合成法即酶法合成 l-肌肽相较于传统的化学合成方法，具有反应条件温和、产物纯度高、收率高、环境污染小等优点。

3、2018年，kino 等研究者在枯草芽孢杆菌中发现 l-氨基酸连接酶可以用于 l-肌肽的合成，但反应需要大量 atp 参与，增加了制备成本。

4、二肽水解酶可以通过催化 l-肌肽的水解的逆反应合成 l-肌肽，2019年，殷东亚课题组通过基因组挖掘获得来自粘质沙雷氏菌的二肽水解酶 smpepd，并发现 smpepd 的活性可被 mn2+ 激活，经优化后的酶可以催化得到 l-肌肽15.2 g/l；2023年，饶志本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种氨肽酶，其特征在于：所述氨肽酶包含有如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

2.一种用于编码氨肽酶的核酸，其特征在于：所述核酸的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

3.根据权利要求2所述的一种用于编码氨肽酶的核酸，其特征在于：以微小囊担子菌MCA4210的总DNA为模板，以引物DmpA-F 5'和DmpA-R 5'为扩增引物，在引物 DmpA-F 5'上引入 EcoRI 酶切位点，在引物 DmpA-R 5'上引入 Hind III 酶切位点，

4.一种重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体包含有SEQ ID NO：1对应的核酸。<...

【技术特征摘要】

1.一种氨肽酶，其特征在于：所述氨肽酶包含有如seq id no：2所示的氨基酸序列。

2.一种用于编码氨肽酶的核酸，其特征在于：所述核酸的核苷酸序列如seq id no：1所示。

3.根据权利要求2所述的一种用于编码氨肽酶的核酸，其特征在于：以微小囊担子菌mca4210的总dna为模板，以引物dmpa-f 5'和dmpa-r 5'为扩增引物，在引物 dmpa-f 5'上引入 ecori 酶切位点，在引物 dmpa-r 5'上引入 hind iii 酶切位点，

4.一种重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体包含有seq id no：1对应的核酸。

5.一种宿主细胞，其特征在于：所述宿主细胞包含有权利要求4所述重组表达载体或基因组中整合有外源的seq id no：1对应的核酸。

6.一种氨肽酶的制备方法，其特征在于：培养权利要求5所述宿主细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：王培，孙晓瑄，汪佳萍，张保国，禹卫东，孟祥燕，孙铭杰，
申请(专利权)人：浙江震元生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：