【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程领域，具体涉及一种构建含有串联重复序列的质粒的方法。
技术介绍
1、串联重复序列(tandem repeat sequences)是指以相对恒定的一或多个碱基组成的短序列为重复单位，首尾相接，串联连接形成的重复序列。带有长片段的串联重复序列的质粒构建一直都是质粒构建中的一个难题，因为构建过程中极易出现碱基的增加或者缺失，造成实际序列与预设序列之间存在偏差，影响应用。目前串联重复序列模板，主要是先采用pcr扩增已有模板或者基因合成的方式获得载体片段和目标片段(串联重复片段)，再采用同源重组或者酶切连接的方式与载体进行连接，不论是扩增或者是基因合成重复序列的方法都会涉及pcr扩增的过程，而扩增过程中串联重复片段非常容易发生增加或缺失的情况，通常要对大量的克隆进行测序验证，才能找到一个碱基和长度完全正确的克隆，然后还要再进行载体骨架的全片段测序。这些都会导致整个构建过程呈现工作量大、测序费用高昂、时间耗费长等问题，如果遇到串联重复片段较长的情况，例如构建带有包含200个碱基a的polya片段的质粒，可能束手无策。
...【技术保护点】
1.一种构建含有串联重复序列的质粒的方法，其包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述带有粘性末端的第一载体骨架为质粒载体经限制性内切酶酶切后得到的线性化载体；
3.根据权利要求1所述的方法，该方法还包括：
4.根据权利要求3所述的方法，其中，在第一双链串联重复序列的上游或下游串联第二双链串联重复序列的过程包括：
5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中，所述各引物的长度各自独立地为60nt-200nt，优选为60nt-144nt，更优选为90nt-136nt；
6.根据权利要求1-5任一项所述的方...
【技术特征摘要】
1.一种构建含有串联重复序列的质粒的方法，其包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述带有粘性末端的第一载体骨架为质粒载体经限制性内切酶酶切后得到的线性化载体；
3.根据权利要求1所述的方法，该方法还包括：
4.根据权利要求3所述的方法，其中，在第一双链串联重复序列的上游或下游串联第二双链串联重复序列的过程包括：
5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中，所述各引物的长度各自独立地为60nt-200nt，优选为60nt-144nt，更优选为90nt-136nt；
6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其中，在梯度温度条件下进...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡勇，吴谦，
申请(专利权)人：深圳瑞吉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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