核糖核酸酶R变体及其应用制造技术

本公开提供了多个RNase R变体及其制备方法，相对于亲本酶，本公开所述的变体RNase R的表达量显著增加，且变体RNase R的酶活可提高3倍，具有良好的工业应用前景。此外，本公开还提供了RNase R变体在线性RNA的降解及circRNA制备中的应用。

【技术实现步骤摘要】

本公开涉及生物，特别是涉及突变的核糖核酸酶r(rnase r)及其应用。

技术介绍

0、专利技术背景

1、环状rna(circrna)是一种共价闭合的单链rna，不含5’-cap和3’-polya结构，不易被rnase降解，其相对于线性mrna具有更高的稳定性，且免疫原性较低，为rna疫苗的开发提供了新思路。随着近年来circrna研究成为热门，底层的制备工艺也逐渐被研究人员关注，circrna的生产过程包括：模板制备、体外转录、dna模板去除、环化和纯化。在rna环化后会残留有未成环的杂质，该部分杂质可通过后期纯化工艺的优化进行去除。相对于该复杂的工艺流程，还有一种通过rnaser降解未成环杂质的方法，该方法也是工艺优化的热门方向。

2、核糖核酸酶r(ribonuclease r，rnase r)属于rnase ii超家族的3’→5’核糖外切酶，可从3’→5’方向将rna逐步切割成二核苷酸和三核苷酸。除了环状rna、套索结构rna和3’突出少于7个核苷酸的短双链rna分子外，rnase r通常可以消化所有的线性rna。因此，在ci本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.RNase R变体，该变体的氨基酸序列与SEQ ID NO：1所示序列具有至少95％的一致性，且包含至少一个选自下述氨基酸位点的突变：T627I、S309G、M692V。

2.如权利要求1所述的变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2-4中任一所示。

3.编码如权利要求1或2所述变体的核酸。

4.根据权利要求3所述的核酸，其核苷酸序列如SEQ ID NO：6-8中任一所示。

5.表达载体，包含如权利要求3或4所述的核酸。

6.宿主细胞，所述宿主细胞转化了如权利要求5所述表达载体。

7.如权利要求1或2所述变体的...

【技术特征摘要】

1.rnase r变体，该变体的氨基酸序列与seq id no：1所示序列具有至少95％的一致性，且包含至少一个选自下述氨基酸位点的突变：t627i、s309g、m692v。

2.如权利要求1所述的变体，其氨基酸序列如seq id no：2-4中任一所示。

3.编码如权利要求1或2所述变体的核酸。

4.根据权利要求3所述的核酸，其核苷酸序列如seq id no：6-8中任一所示。

5.表达载体，包含...

【专利技术属性】
技术研发人员：金秋恒，何伟，徐晓昱，任渊渊，季桂英，
申请(专利权)人：南京诺唯赞生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：