【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，尤其涉及生物标志物在胰腺癌评估中的应用，具体涉及生物标志物的检测试剂在制备用于评估、诊断或监测胰腺癌的组合物或试剂盒中的应用。
技术介绍
1、胰腺癌是发病率和死亡率均较高的消化道恶性肿瘤，其中超过90％的为胰腺导管腺癌。由于胰腺特殊的解剖位置早期发病无症状，确诊时患者已为晚期，但只有小于20％的晚期患者可以通过手术干预治疗，因此胰腺癌预后较差，患者五年生存率小于9％。如若能早期发现，胰腺癌患者五年生存率可提高至30％～40％。同时有些胰腺肿块与良性胰腺囊肿或慢性胰腺炎难以区分，而慢性胰腺炎又可增加胰腺导管腺癌的患病风险。因此，如何从健康人和胰腺炎人群干扰中准确高效的对胰腺癌鉴别诊断在临床上具有重要意义。
2、目前，胰腺导管腺癌的诊断方法有胸部影像学、内镜超声引导下细针穿刺活检(eus-fna)以及糖类抗原19-9(ca19-9)检测等，但这些方法的检测效果均有一定的局限性。胸部影像学检查方法包括ct、核磁共振成像(mri)和pet-ct等，但影像学检测方法对实质性病变检测敏感性较差，如mri检测实质性病变的敏感性只有22％，对小于1cm的囊性病变检测敏感性也只有82％。而eus-fna是一种侵入性检测方法，容易引起感染、出血和肿瘤扩散的风险，同时假阳性率较高，会导致切除的组织学检查结果显示为良性的病变。ca19-9是基于血液的肿瘤标志物被广泛用于胰腺癌的复发监测，研究显示ca19-9对胰腺癌和良性胰腺疾病诊断的敏感性和特异性不佳分别是78.2％和82.8％，无法作为有效的早期诊断肿瘤标志物。因此，
3、小型胞外囊泡(small extracellular vesicles，sevs)是一种直径约30-150nm的小囊泡，又称外泌体。外泌体由于其丰富的内容物和可反应自身正常及异常的生理状态等作为一种重要液体活检形式已得到人们的广泛关注和深入研究，研究显示来源于血液小型胞外囊泡的mirna是一种潜在的肿瘤标志物应用于胰腺癌的早期诊断。shiwei guo等人的研究表明胰腺导管腺癌vs慢性胰腺炎患者中血浆小型胞外囊泡mirna表达存在一些差异，根据hsa-mir-95-3p/hsa-mir-26b-5p构建的胰腺癌诊断模型平均敏感性和特异性分别是84.1％和96.6％，将诊断模型与血清ca19-9结合可将胰腺癌诊断模型的平均敏感性提高至96.5％。然而，以健康人和慢性胰腺炎人群为对照组的研究较少，而基于芯片或rt-pcr技术发现的胰腺癌和非胰腺癌诊断模型效能不佳，又无法发现小型胞外囊泡中未知的mirna，导致缺乏高效的血液小型胞外囊泡mirna生物标志物对胰腺癌进行早期诊断。
4、cn103361424a公开了一种诊断受试者是否患有胰腺癌或处于发生胰腺癌的风险中的方法，包括测量来自所述受试者的测试样品中至少一种mir基因产物的水平，其中与对照样品中的相应的mir基因产物的水平相比，测试样品中的所述mir基因产物的水平的改变，指示着受试者患有胰腺癌或处于发生胰腺癌的风险中。但该专利主要基于胰腺癌细胞中特定mirna表达差异来鉴别，且诊断效果未知。
5、综上所述，如何开发一种用于诊断胰腺癌的高敏感性和高特异性的诊断生物标志物，已成为目前本领域亟待解决的问题。
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种用于胰腺癌诊断的生物标志物及其应用，以及生物标志物的检测试剂在制备用于评估、诊断或监测胰腺癌的组合物或试剂盒中的应用，通过发现并验证高效能的mirna生物标志物，同时联合血清ca19-9水平建立高效能的诊断模型，提高胰腺癌早期诊断的准确性，并降低胰腺癌诊断的假阳性率，延长胰腺癌患者的存活时间。
2、为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供了生物标志物的检测试剂在制备用于评估、诊断或监测胰腺癌的组合物或试剂盒中的应用，所述生物标志物包括microrna；所述microrna包括hsa-let-7b-5p、hsa-let-7e-5p、hsa-mir-122-5p、hsa-mir-140-3p、hsa-mir-142-5p、hsa-mir-144-3p、hsa-mir-150-5p、hsa-mir-200a-3p、hsa-mir-223-3p、hsa-mir-24-2-5p、hsa-mir-26b-5p、hsa-mir-30d-5p、hsa-mir-423-5p、hsa-mir-486-5p或hsa-mir-95-3p中的任意一种或至少两种的组合。
4、本专利技术提供了一种microrna的组合，作为胰腺癌、慢性胰腺炎和健康个体诊断的高效能生物标志物，提高了胰腺癌诊断的准确性。
5、优选地，所述microrna包括hsa-let-7e-5p、hsa-mir-122-5p、hsa-mir-26b-5p、hsa-mir-30d-5p、hsa-mir-423-5p、hsa-mir-486-5p和hsa-mir-95-3p中的任意一种或至少两种的组合。
6、优选地，所述microrna包括hsa-mir-486-5p、hsa-mir-423-5p、hsa-mir-26b-5p、hsa-mir-95-3p和hsa-mir-122-5p。
7、优选地，所述生物标志物还包括ca19-9。
8、糖类抗原ca19-9是一种粘蛋白型的糖类蛋白肿瘤标志物，为细胞膜上的糖脂质，属lewis血型抗原类肿瘤标志物，在血清中以唾液粘蛋白形式存在。本专利技术通过将microrna标志物与ca19-9结合，进一步提高胰腺癌早期诊断的准确性，同时降低胰腺癌诊断的假阳性率。
9、优选地，所述生物标志物用于区分健康人、胰腺炎患者和胰腺癌患者。
10、优选地，所述microrna来源于小型胞外囊泡。
11、优选地，所述小型胞外囊泡来源于血液、血清、浆膜液、血浆、淋巴、尿、脑脊液、唾液、阴道分泌物、乳汁、眼泪或腹水中的任意一种或至少两种的组合。
12、优选地，所述microrna来源于血液小型胞外囊泡。
13、优选地，所述ca19-9来源于血清。
14、优选地，所述hsa-mir-486-5p的核酸序列包括seq id no.1所示的序列。
15、优选地，所述hsa-mir-423-5p的核酸序列包括seq id no.2所示的序列。
16、优选地，所述hsa-mir-26b-5p的核酸序列包括seq id no.3所示的序列。
17、优选地，所述hsa-mir-95-3p的核酸序列包括seq id no.4所示的序列。
18、优选地，所述hsa-mir-122-5p的核酸序列包括seq id no.5所示的序列。
19、seq id no.1：uccuguacugagcugccccgag。
20本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.生物标志物的检测试剂在制备用于评估、诊断或监测胰腺癌的组合物或试剂盒中的应用，其特征在于，所述生物标志物包括microRNA；所述microRNA包括hsa-let-7b-5p、hsa-let-7e-5p、hsa-miR-122-5p、hsa-miR-140-3p、hsa-miR-142-5p、hsa-miR-144-3p、hsa-miR-150-5p、hsa-miR-200a-3p、hsa-miR-223-3p、hsa-miR-24-2-5p、hsa-miR-26b-5p、hsa-miR-30d-5p、hsa-miR-423-5p、hsa-miR-486-5p或hsa-miR-95-3p中的任意一种或至少两种的组合。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述microRNA包括hsa-let-7e-5p、hsa-miR-122-5p、hsa-miR-26b-5p、hsa-miR-30d-5p、hsa-miR-423-5p、hsa-miR-486-5p和hsa-miR-95-3p中的任意一种或至少两种的组合。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述microRNA来源于小型胞外囊泡；
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述hsa-miR-486-5p的核酸序列包括SEQID NO.1所示的序列；
6.如权利要求1-5任一项中所述的生物标志物在胰腺癌诊断中的应用。
7.一种用于评估、诊断或监测胰腺癌的组合物或试剂盒，其特征在于，所述组合物或试剂盒包括权利要求1-5任一项中所述的生物标志物的检测试剂。
8.根据权利要求7所述的组合物或试剂盒，其特征在于，所述组合物或试剂盒包括检测microRNA含量的试剂和检测CA19-9含量的试剂；
9.一种患胰腺癌风险的诊断模型，其特征在于，使用权利要求1-5任一项中所述的生物标志物hsa-miR-486-5p、hsa-miR-423-5p、hsa-miR-26b-5p、hsa-miR-95-3p和hsa-miR-122-5p以及CA19-9，采用K近邻、随机森林、极限随机树、神经网络和梯度提升机共5种机器学习算法，针对每种算法预设不同的超参数，利用训练集样本数据训练机器学习算法，获得所述诊断模型。
10.根据权利要求9所述的诊断模型，其特征在于，所述诊断模型的风险评分模型如下所示：
...【技术特征摘要】
1.生物标志物的检测试剂在制备用于评估、诊断或监测胰腺癌的组合物或试剂盒中的应用，其特征在于，所述生物标志物包括microrna；所述microrna包括hsa-let-7b-5p、hsa-let-7e-5p、hsa-mir-122-5p、hsa-mir-140-3p、hsa-mir-142-5p、hsa-mir-144-3p、hsa-mir-150-5p、hsa-mir-200a-3p、hsa-mir-223-3p、hsa-mir-24-2-5p、hsa-mir-26b-5p、hsa-mir-30d-5p、hsa-mir-423-5p、hsa-mir-486-5p或hsa-mir-95-3p中的任意一种或至少两种的组合。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述microrna包括hsa-let-7e-5p、hsa-mir-122-5p、hsa-mir-26b-5p、hsa-mir-30d-5p、hsa-mir-423-5p、hsa-mir-486-5p和hsa-mir-95-3p中的任意一种或至少两种的组合。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述microrna包括hsa-mir-486-5p、hsa-mir-423-5p、hsa-mir-26b-5p、hsa-mir-95-3p和hsa-...
【专利技术属性】
技术研发人员：张大东，许晓雅，刘冬雨，冯雁，杨旻，张亚楠，年宝宁，陈升，李志宽，
申请(专利权)人：上海思路迪医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。