【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及通过提供脱氢甘氨酸(dhg)和this硫代羧化蛋白的增加生产而具有增加产量的硫胺素的经基因修饰的宿主细胞，涉及用于表达此类突变体的基因构建体；涉及经基因修饰的宿主细胞的培养物及其用于生产所述产品的用途；涉及包含由此类生产产生的所述产品的发酵液；涉及包含发酵液的组合物；涉及由此类组合物制成的膳食、调味剂或药物制剂以及此类组合物和制剂的用途。
技术介绍
1、在自然界中，硫胺素是由一些微生物和植物产生的。天然生物中硫胺素的生物合成途径在本领域中通常被很好地描述，该途径如图1所示。
2、如今，硫胺素是通过使用基于不可再生化石燃料的化学合成工艺进行工业生产的，并且没有可用的基于发酵的生产。然而，需要利用糖等可再生来源开发更具可持续性的生物基工艺。由于微生物只需要少量的硫胺素，因此最大的挑战是改造微生物以产生大量的这种维生素。
3、使用基于微生物的细胞工厂是生物合成生产b族维生素的潜在途径(acevedo-rocha等人，2019年)。大肠杆菌等重组微生物作为生产生物产品的微生物细胞工厂的优势得到广泛认可，因为...
【技术保护点】
1.具有改进的硫胺素生产的经基因修饰的宿主细胞，其中所述宿主细胞表达一种或多种异源ThiO酶，将所述宿主细胞中的甘氨酸转化为脱氢甘氨酸(DHG)，因此与未修饰的亲本宿主细胞相比，所述经基因修饰的宿主细胞中的硫胺素生产得到改进。
2.具有改进的硫胺素生产的经基因修饰的宿主细胞，其中所述宿主细胞表达一种或多种异源ThiI酶，催化硫从IscS转移到所述宿主细胞中的硫载体蛋白ThiS，因此与未修饰的亲本宿主细胞相比，所述经基因修饰的宿主细胞中的硫胺素生产得到改进。
3.根据权利要求1所述的宿主细胞，其中所述一种或多种异源ThiO酶是细菌ThiO酶。p>
4.根据权...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.具有改进的硫胺素生产的经基因修饰的宿主细胞，其中所述宿主细胞表达一种或多种异源thio酶，将所述宿主细胞中的甘氨酸转化为脱氢甘氨酸(dhg)，因此与未修饰的亲本宿主细胞相比，所述经基因修饰的宿主细胞中的硫胺素生产得到改进。
2.具有改进的硫胺素生产的经基因修饰的宿主细胞，其中所述宿主细胞表达一种或多种异源thii酶，催化硫从iscs转移到所述宿主细胞中的硫载体蛋白this，因此与未修饰的亲本宿主细胞相比，所述经基因修饰的宿主细胞中的硫胺素生产得到改进。
3.根据权利要求1所述的宿主细胞，其中所述一种或多种异源thio酶是细菌thio酶。
4.根据权利要求2所述的宿主细胞，其中所述一种或多种异源thii酶是细菌thii酶。
5.根据权利要求1或3所述的宿主细胞，其中所述一种或多种异源细菌thio酶是来自枯草芽孢杆菌的bsthio酶和/或来自恶臭假单胞菌的ppthio酶。
6.根据前述权利要求中任一项所述的宿主细胞，其中一种或多种异源：
7.根据权利要求2或4所述的宿主细胞，其中所述一种或多种细菌thii酶是具有seq idno:23的大肠杆菌thii酶
8.根据权利要求3或5所述的宿主细胞，其中所述一种或多种异源细菌thio酶是具有seq id no:27的来自枯草芽孢杆菌的bsthio酶和/或具有seq id no:29的来自恶臭假单胞菌的ppthio酶。
9.根据前述权利要求中任一项所述的宿主细胞，其中所述基因编码：
10.根据前述权利要求中任一项所述所述的宿主细胞，其中
11.根据权利要求7或9所述的宿主细胞，其中所述thii基因是截短的thii基因。
12.根据权利要求11所述的宿主细胞，其中所述thii基因是截短的thii，其包含硫氰酸酶结构域，所述硫氰酸酶结构域将硫从过硫化物iscs转移到所述硫载体蛋白this，在所述硫胺素生物合成途径中形成this-硫代羧酸。
13.根据权利要求12所述的宿主细胞，其中所述硫氰酸酶结构域与seq id no:13中包含的所述硫氰酸酶结构域至少70％相同，例如至少80％相同，例如至少90％相同，例如至少95％相同，例如至少96％相同，例如至少97％相同，例如至少98％相同，例如至少99％相同，例如100％相同。
14.根据前述权利要求中任一项所述的宿主细胞，其进一步包括包含产生所述硫胺素的一种或多种天然或异源途径元素的有效代谢途径。
15.根据权利要求14所述的宿主细胞，其中一种或多种途径元素包括一种或多种自由基sam酶。
16.根据前述权利要求中任一项所述的宿主细胞，其中一种或多种途径元素选自：
17.根据权利要求14至16所述的宿主细胞，其中一种或多种途径元素由选自以下组中的一种或多种基因编码：
18.根据前述权利要求中任一项所述的宿主细胞，其中所述内源性天然thih基因被破坏或失活。
19.根据权利要求18所述的宿主细胞，其中所述破坏/失活是通过完全去除基因而引入缺失或通过引入一个或多个终止密码子或移码突变而导致翻译敲除从而阻止活性肽的表达而引起的。
20.根据权利要求18或19所述的宿主细胞，其中所述破坏/失活包括翻译敲除或移码突变。
21.根据权利要求18至20所述的宿主细胞，其中所述缺失、破坏和/或减弱是蛋白质编码序列的启动子、所述rbs区域和/或蛋白质编码序列中的点突变。
22.根据前述权利要求中任一项所述的宿主细胞，其中一种或多种途径元素由选自以下组中的一种或多种基因编码：
23.根据前述权利要求中任一项所述的宿主细胞，其中所述硫胺素途径的一个或多个基因和/或多肽与所述宿主细胞异源。
24.根据前述权利要求中任一项所述的宿主细胞，其还包含所述硫胺素途径的一个或多个基因和/或多肽的至少2个拷贝。
25.根据前述权利要求中任一项所述的宿主细胞，其还包含促进所述硫胺素途径前体或产物的运输的转运分子。
26.根据前述权利要求中任一项所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞进一步经基因修饰以提供所述硫胺素途径中增加的底物量。
27.根据前述权利要求中任一项所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞进一步经基因...
【专利技术属性】
技术研发人员：C·G·阿塞维多·罗查，D·B·博尼法西奥，B·J·卡德尔，H·J·吉尼，D·伦诺克斯·赫文基尔德，B·萨洛蒙森，
申请(专利权)人：拜奥信尼亚私营有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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