一种单碱基突变检测方法技术

本发明专利技术属于单碱基突变检测技术领域，公开了一种可兼容多种核酸扩增的模块化探针设计方法，通过协同核酸杂交和酶连接识别，克服常规核酸探针的识别盲区限制，实现跨靶标序列全段的碱基分辨，用于基因多位点突变的解析。本发明专利技术检测过程能够分析在溶液中携带多个临近突变的核酸靶标，可用于分析短microRNA和基因靶点，且本发明专利技术检测方法特异性高、灵敏度高、通用性强，可广泛用于复杂样本的SNV分析。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞内单碱基突变检测，具体涉及一种可兼容多种核酸扩增的模块化探针设计方法，并偶联多重连接过程，利用核酸杂交和酶连接的协同识别，实现了跨靶标序列全段的单碱基差异分辨的检测方法。

技术介绍

1、单核苷酸差异的遗传变异，如单核苷酸变异(snv)与许多人类疾病如癌症和耐药性密切相关，因此是疾病诊断和预后的重要生物标志物。对snv进行经济、准确和可靠的检测是满足日益增长的精确诊断和药物需求的关键目标之一。尽管基于测序的方法能够实现大量snv的高通量发现和同时分析，但是高的前期成本和低可及性限制了它们在常规临床用途中的广泛使用，其中仅需要监测少数热点snv。另一方面，基于等位基因特异性杂交或酶促反应的测定是简单的、具有成本效益的，允许在常规临床和即时护理环境中快速分析热点snv。

2、大多数等位基因特异性测定的性能强烈依赖于突变的位置。对于基于杂交的方法，如分子信标或支点交换探针，需要在探针中间放置靶突变，因为当错配位于末端时，这些探针通常会失去特异性。相比之下，基于酶的方法，如连接介导的挂锁探针和arms-pcr，只能区分探针或引物末端的错本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种单碱基突变检测方法，描述了协同识别探针(CPR)的设计，其整合了基于杂交和连接的识别机制，因此对于遍及所有位置的区分突变有效；CPR的协同机制进一步使得能够以高保真度和特异性进行基于与门的多个临近突变的检测；此外，CPR产生环状或线性连接产物，其可以容易地通过滚环扩增或聚合酶链式反应扩增，使得我们的策略容易地适用于不同的样品灵敏检测。

2.如权利要求1所述，本方法利用协同识别探针(CRP)对单个靶中的多个临近突变的同质和高保真检测，所述协同识别探针能够将一系列基于杂交的鉴别事件与基于连接的鉴别反应整合，实现跨靶标序列全段的碱基分辨，用于基因多位点突变的解析。

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【技术特征摘要】

1.一种单碱基突变检测方法，描述了协同识别探针(cpr)的设计，其整合了基于杂交和连接的识别机制，因此对于遍及所有位置的区分突变有效；cpr的协同机制进一步使得能够以高保真度和特异性进行基于与门的多个临近突变的检测；此外，cpr产生环状或线性连接产物，其可以容易地通过滚环扩增或聚合酶链式反应扩增，使得我们的策略容易地适用于不同的样品灵敏检测。

2.如权利要求1所述，本方法利用协同识别探针(crp)对单个靶中的多个临近突变的同质和高保真检测，所述协同识别探针能够将一系列基于杂交的鉴别事件与基于连接的鉴别反应整合，实现跨...

【专利技术属性】
技术研发人员：请求不公布姓名，请求不公布姓名，请求不公布姓名，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：