一种用于纯化包涵体蛋白的助复性标签及其基因衍生产品和应用制造技术

本发明专利技术提供了一种用于纯化包涵体蛋白的助复性标签及其基因衍生产品和应用，属于蛋白纯化技术领域。本发明专利技术提供了一种助复性标签P67，氨基酸序列如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:3所示中至少一种，其中第33位氨基酸为赖氨酸、谷氨酸或脯氨酸。本发明专利技术所述助复性标签P67与目标蛋白在原核生物中融合表达使重组表达的包涵体(难溶性包涵体)成功复性，且具备生物学活性。所述助复性标签P67为后续蛋白质功能研究和应用转化建立基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于蛋白纯化，具体涉及一种用于纯化包涵体蛋白的助复性标签及其基因衍生产品和应用。

技术介绍

1、蛋白质是生命功能的主要执行者，能够成功纯化具有生物学活性的蛋白质对后续的蛋白质功能研究和转化应用至关重要。目前，利用基因重组和原核表达纯化系统使很多蛋白成功纯化。而未能成功纯化蛋白的最大障碍是重组蛋白形成包涵体(inclusion body，ib)。ib蛋白在宿主菌内的初始诱导表达阶段是不可溶的。在后续提取和纯化过程中，变性剂(尿素和盐酸胍)的加入使得ib蛋白处于溶解状态。然而，变性后的ib必须要经过缓慢的复性步骤来去除变性剂，使ib蛋白重新正确折叠，重获可溶性和生物学活性。所以，复性过程对ib蛋白的成功纯化尤其重要。根据复性过程的难易程度，ib蛋白可以被分成易复性包涵体(renaturation-easy inclusion body，reib)和难复性包涵体(renaturation-resistant inclusion body，rrib)两类。其中，rrib在复性过程中形成聚集物和沉淀是导致包涵体蛋白纯化失败的主要原因。虽然一些研究发现添加小本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种助复性标签P67，其特征在于，包括以下至少一种：PCC标签、PC标签、ACCA标签和所述PCC标签、PC标签或ACCA标签的突变体；

2.一种权利要求1所述助复性标签P67的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:4～SEQ ID NO:8所示中以下至少一种。

3.一种原核生物蛋白表达工具质粒，其特征在于，包含表达权利要求1所述助复性标签P67的核酸分子或权利要求2所述编码基因。

4.根据权利要求3所述原核生物蛋白表达工具质粒，其特征在于，是以pET41a载体为骨架载体，其中GST标签替换为所述编码基因。

...

【技术特征摘要】

1.一种助复性标签p67，其特征在于，包括以下至少一种：pcc标签、pc标签、acca标签和所述pcc标签、pc标签或acca标签的突变体；

2.一种权利要求1所述助复性标签p67的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列如seq id no:4～seq id no:8所示中以下至少一种。

3.一种原核生物蛋白表达工具质粒，其特征在于，包含表达权利要求1所述助复性标签p67的核酸分子或权利要求2所述编码基因。

4.根据权利要求3所述原核生物蛋白表达工具质粒，其特征在于，是以pet41a载体为骨架载体，其中gst标签替换为所述编码基因。

5.根据权利要求4所述原核生物重组工具质粒，其特征在于，还包括hrv-3c蛋白酶识...

【专利技术属性】
技术研发人员：李咏，司云龙，张波，倪思宇，王彤，
申请(专利权)人：徐州医科大学，
类型：发明
国别省市：

全部详细技术资料下载 我是这个专利的主人