GALECTIN-1基因敲除的DC2.4细胞及其在抗原递呈研究中的应用制造技术

本发明专利技术提供了GALECTIN‑1基因敲除的DC2.4细胞及其在抗原递呈研究中的应用，属于基因工程技术领域。本发明专利技术用SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的双链DNA构建重组CRISPR/Cas9质粒，并将重组质粒包装成慢病毒，用慢病毒感染细胞，获得敲除GALECTIN‑1基因的细胞。Western Blot检测结果表明，该方法在蛋白水平上实现了鼠GALECTIN‑1基因敲除，并能稳定遗传。本发明专利技术的sgRNA、敲除载体可用于鼠GALECTIN‑1基因的定向敲除，具有简便、高效、快速、低成本等特点，对于鼠GALECTIN‑1基因功能及其在适应性免疫中对抗原递呈的研究具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程，尤其涉及galectin-1基因敲除的dc2.4细胞及其在抗原递呈研究中的应用。

技术介绍

1、crispr/cas9技术是来源于细菌和古生菌中的一种由sgrna(small guide rna)介导的适应性免疫系统。其中sgrna用于识别、结合靶点dna，当cas9蛋白活性被激活后可结合区域下游的dna并对其进行切割，生成双链dna断裂，诱发由非同源末端连接修复机制造成的移码突变，从而实现对靶基因的编辑。crispr/cas9技术因其简便和高效的特性，近几年来作为真核基因进行定点编辑的重要遗传手段在人类及动植物基因功能研究领域得到广泛应用。

2、半乳糖凝集素-1(galectin-1)是原型半乳糖凝集素，一种免疫调节蛋白，通过调节免疫细胞的功能参与免疫反应，例如半乳糖凝集素-1可以通过与t细胞表上的cd45和cd7结合诱导t细胞凋亡。另外，galectin-1在细胞生物学和免疫学等不同领域得到广泛的研究，尤其是galectin-1与癌症生物学密切相关。galectin-1能够增强致癌信号通路，调节肿瘤细胞生长或凋亡，调本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种敲除鼠GALECTIN-1基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQID No.1所示。

2.一组双链DNA，其特征在于，所述双链DNA的上游序列如SEQ ID NO.3所示，所述双链DNA的下游序列如SEQ ID NO.4所示。

3.包含权利要求1所述的sgRNA或权利要求1所述的双链DNA的重组载体。

4.一种GALECTIN-1基因的敲除方法，其特征在于，包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述的GALECTIN-1基因的敲除方法，其特征在于，所述慢病毒包装载体包括psPAX2和pMD2.G；所述重组质粒与...

【技术特征摘要】

1.一种敲除鼠galectin-1基因的sgrna，其特征在于，所述sgrna的核苷酸序列如seqid no.1所示。

2.一组双链dna，其特征在于，所述双链dna的上游序列如seq id no.3所示，所述双链dna的下游序列如seq id no.4所示。

3.包含权利要求1所述的sgrna或权利要求1所述的双链dna的重组载体。

4.一种galectin-1基因的敲除方法，其特征在于，包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述的galectin-1基因的敲除方法，其特征在于，所述慢病毒包装载体包括pspax2和pmd2.g；所述重组质粒与pspax2、pmd2.g的质量比为2～3:1～2:1。

6.根据权利要求4所述的gal...

【专利技术属性】
技术研发人员：裴晶晶，张利红，郑海学，汪洋，郑琳琳，齐晓兰，张钊，陈志华，翟凤格，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心，
类型：发明
国别省市：