【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、存在可以追溯到dna的变化的人疾病亚群，这些变化是遗传的或是在胚胎发育早期获得的。基因疗法的开发人员特别感兴趣的是由单个基因突变引起的疾病，称为单基因疾病。据信有超过6,000种单基因疾病。典型地，由遗传突变引起的任何特定遗传疾病都相对罕见，但总体而言，遗传相关疾病的死亡率很高。熟知的遗传疾病包括囊性纤维化、进行性假肥大性肌营养不良、亨廷顿病和镰状细胞病。其他类别的遗传疾病包括代谢障碍，诸如有机酸血症和溶酶体贮积病，其中功能异常基因导致代谢过程方面的缺陷和有毒副产物的积累，这可以在短期和长期方面均导致严重的发病率和死亡率。
技术实现思路
1、由功能异常基因引起的遗传疾病占全世界疾病的很大一部分。基因疗法正在成为一种有前景的治疗形式，旨在减轻遗传疾病的影响。
2、在本披露之前，利用同源重组的某些aav基因疗法在不存在核酸酶的情况下采用病毒载体组合物以在特定位点处引入目的转基因。除其他事项外，本披露认识到这种载体与一种或多种核酸酶的组合(例如，以单一组合物或作为分开...
【技术保护点】
1.一种组合物或组合物组，该组合物或组合物组包含：
2.如权利要求1所述的组合物或组合物组，其中该靶整合位点是包含内源白蛋白启动子和内源白蛋白基因的白蛋白基因座。
3.一种组合物或组合物组，该组合物或组合物组包含：
4.如权利要求1-3中任一项所述的组合物或组合物组，该组合物或组合物组进一步包含重组病毒载体。
5.如权利要求4所述的组合物或组合物组，其中该重组病毒载体是重组AAV载体。
6.如权利要求5所述的组合物或组合物组，其中该重组病毒载体是或包含衣壳多肽，该衣壳多肽包含与以下的氨基酸序列具有至少95％序...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种组合物或组合物组，该组合物或组合物组包含：
2.如权利要求1所述的组合物或组合物组，其中该靶整合位点是包含内源白蛋白启动子和内源白蛋白基因的白蛋白基因座。
3.一种组合物或组合物组，该组合物或组合物组包含：
4.如权利要求1-3中任一项所述的组合物或组合物组，该组合物或组合物组进一步包含重组病毒载体。
5.如权利要求4所述的组合物或组合物组，其中该重组病毒载体是重组aav载体。
6.如权利要求5所述的组合物或组合物组，其中该重组病毒载体是或包含衣壳多肽，该衣壳多肽包含与以下的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列：sl65、lk03、aav8、aav-dj；aav-lk03；或aavnp59。
7.如权利要求6所述的组合物或组合物组，其中该重组病毒载体包含该衣壳多肽并且该编码核酸酶的多核苷酸序列和/或该多核苷酸盒被衣壳化在该重组病毒载体中。
8.如权利要求6所述的组合物或组合物组，其中该多核苷酸盒被衣壳化在该重组病毒载体中。
9.如权利要求1-8中任一项所述的组合物或组合物组，该组合物或组合物组进一步包含aav2末端反向重复(itr)序列。
10.如权利要求9所述的组合物或组合物组，其中该aav2 itr序列位于该编码该核酸酶的多核苷酸序列和/或该多核苷酸盒的5'末端和3'末端侧翼。
11.如权利要求1-10中任一项所述的组合物或组合物组，其中该第三核酸序列和该第四核酸序列各自的长度在50nt和1600nt之间。
12.如权利要求1-11中任一项所述的组合物或组合物组，其中该第三核酸序列和该第四核酸序列的长度相同。
13.如权利要求1-12中任一项所述的组合物或组合物组，其中该第三核酸序列和该第四核酸序列的长度不同。
14.如权利要求1-13中任一项所述的组合物或组合物组，其中在该多核苷酸盒整合到该细胞的基因组中的该靶整合位点中后，该转基因在该靶整合位点处的内源启动子的控制下被表达。
15.如权利要求2-14中任一项所述的组合物或组合物组，其中该靶整合位点在该白蛋白基因座的编码序列内并且与终止密码子5’相邻。
16.如权利要求15所述的组合物或组合物组，其中该靶整合位点与该白蛋白基因座的外显子14中的终止密码子5'相邻。
17.如权利要求1-16中任一项所述的组合物或组合物组，其中该切割位点在该白蛋白基因座的非编码序列内。
18.如权利要求17所述的组合物或组合物组，其中该切割位点在该白蛋白基因座的内含子、非翻译区、增强子、启动子、沉默子或绝缘子内。
19.如权利要求18所述的组合物或组合物组，其中该切割位点在该白蛋白基因座的内含子12、13或14内。
20.如3至18中任一项所述的组合物或组合物组，其中该核酸酶选自cas酶、talen、tale切口酶、zfn、zf切口酶或大范围核酸酶。
21.如权利要求1-20中任一项所述的组合物或组合物组，其中该核酸酶是cas酶或talen。
22.如权利要求1-21中任一项所述的组合物或组合物组，其中该核酸酶是cas酶。
23.如权利要求1-22中任一项所述的组合物或组合物组，其中该cas酶选自金黄色葡萄球菌cas9(sacas9)、酿脓链球菌(spcas9)、az核酸酶、hf1-cas9、hf2-cas9或hifi-cas9。
24.如权利要求22或23所述的组合物或组合物组，该组合物或组合物组进一步包含指导rna(grna)。
25.如权利要求24所述的组合物或组合物组，其中该grna包含seq id no:27-45、71-86或93-98中的任一个的核酸序列、或与seq id no:27-45、71-86或93-98中的任一个具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的核酸序列。
26.如权利要求24或25所述的组合物或组合物组，其中该核酸酶或该编码该核酸酶的多核苷酸序列与该grna共配制。
27.如权利要求24或25所述的组合物或组合物组，其中该核酸酶或该编码该核酸酶的多核苷酸序列与该grna分开配制。
28.如权利要求1-27中任一项所述的组合物或组合物组，其中该第二核酸序列是或包含：
29.如权利要求1-28中任一项所述的组合物或组合物组，其中该第二核酸序列是或包含编码2a肽的核酸序列。
30.如权利要求29所述的组合物或组合物组，其中该第二核酸是或包含编码选自由p2a、t2a、e2a和f2a组成的组的2a肽的核酸序列。
31.如权利要求1或3所述的组合物或组合物组，其中该切割位点距离该靶整合位点1bp和2000bp之间。
32.如权利要求31所述的组合物或组合物组，其中该切割位点距离该靶整合位点多达100bp。
33.如权利要求1-32中任一项所述的组合物或组合物组，其中该转基因选自cbs、ugt1a1、mut、fah、atp7b、a1at、asl、lipa、pah、g6pc、因子ix或其变体。
34.如权利要求1-33中任一项所述的组合物或组合物组，其是组合物组，其中该核酸酶或该编码该核酸酶的多核苷酸序列被配制在脂质纳米颗粒(lnp)中，并且该多核苷酸盒被衣壳化在重组aav载体中。
35.一种将转基因整合到人细胞的基因组中的方法，所述方法包括
36.如权利要求35所述的方法，其中该靶整合位点是包含内源白蛋白启动子和内源白蛋白基因的白蛋白基因座。
37.一种将转基因整合到人细胞的基因组中的方法，所述方法包括
38.如权利要求35-37中任一项所述的方法，其中该组合物或该组合物组进一步包含重组病毒载体。
39.如权利要求38所述的方法，其中该重组病毒载体是重组aav载体。
40.如权利要求39所述的方法，其中该重组病毒载体是或包含衣壳多肽，该衣壳多肽包含与以下的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列：lk03、aav8、aav-dj；aav-lk03...
【专利技术属性】
技术研发人员：志杰·汪，汪少斌，唐纳德·詹姆斯·福斯特，安妮特·贝克，周丽萍，程北，
申请(专利权)人：逻辑生物治疗公司，
类型：发明
国别省市：
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