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针对非结核分枝杆菌检测与鉴定的实时荧光PCR检测方法技术

技术编号:44518092 阅读:20 留言:0更新日期:2025-03-07 13:12
本发明专利技术提供针对非结核分枝杆菌检测与鉴定的实时荧光PCR检测方法,涉及生物检测的技术领域,包括以下操作步骤:S1:提取待测样品的DNA:S2:第一次PCR扩增:设计引物:以分枝杆菌的16S rRNA基因3’端和23S rRNA基因5’端设计引物Mp1和Mp2;以提取的待测样品DNA为模板,使用引物Mp1和Mp2进行第一次PCR扩增;S3:实时荧光PCR检测与鉴定非结核分枝杆菌种以第一次PCR扩增产物为实时荧光PCR模板;设计多组特异性检测引物和探针,用于非结核分枝杆菌的检测和鉴定;以特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR检测第二次检测与鉴定。以特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR检测与鉴定,在保持非结核分枝杆菌种特异性的同时,提高检测灵敏度,适合于血标本检测,也适合临床其他标本,如痰标本,培养分离株等。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物检测的,具体而言,涉及一种针对非结核分枝杆菌检测与鉴定的实时荧光pcr检测方法。


技术介绍

1、分枝杆菌包括结核分枝杆菌和几十种其他分枝杆菌(统称为非结核分枝杆菌),与人类疾病相关的分枝杆菌主要是结核分枝杆菌和十多种非结核分枝杆菌,如鸟分枝杆菌,戈登分枝杆菌等。

2、目前临床实验诊断方法主要有三大类:涂片抗酸染色镜检、分枝杆菌培养和实时荧光pcr,其中涂片镜检敏感度和特异性最低,细菌培养阳性率次之且耗时长(约10-45天),而实时荧光pcr敏感度和特异性最好,速度最快。

3、目前主流的实时荧光pcr检测方法是以美国genexpert检测仪为代表,该方法的灵敏度也只有约40%的阳性率,且只能检测结核分枝杆菌,不能检测非结核分枝杆菌。这是因为该检测系统只设计了检测结核分枝杆菌的引物与探针,没有设计各非结核分枝杆菌的相应的检测与鉴定引物与探针,所以不能检测非结核分枝杆菌,只能检测结核分枝杆菌。

4、与结核分枝杆菌相比,非结核分枝杆菌的致病性/毒力相当较弱,临床症状也不如结核分枝杆菌感染后那么典型,病灶部位也不本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.针对非结核分枝杆菌检测与鉴定的实时荧光PCR检测方法,其特征在于,包括以下操作步骤:

2.根据权利要求1所述的实时荧光PCR检测方法,其特征在于,

3.根据权利要求1所述的实时荧光PCR检测方法,其特征在于,

4.根据权利要求3所述的实时荧光PCR检测方法,其特征在于,

5.根据权利要求3所述的实时荧光PCR检测方法,其特征在于,

6.根据权利要求1~5任一项所述的实时荧光PCR检测方法,其特征在于,所述待测样品为痰标本或血标本。

【技术特征摘要】

1.针对非结核分枝杆菌检测与鉴定的实时荧光pcr检测方法,其特征在于,包括以下操作步骤:

2.根据权利要求1所述的实时荧光pcr检测方法,其特征在于,

3.根据权利要求1所述的实时荧光pcr检测方法,其特征在于,

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【专利技术属性】
技术研发人员:陈建波
申请(专利权)人:陈建波
类型:发明
国别省市:

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