【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药，具体涉及ha-pei-mir-146a纳米复合材料的制备和在牙周治疗中的抗炎应用。
技术介绍
1、目前，牙周的治疗方法主要是通过牙周基础治疗控制牙周炎症，再辅以激光等进行治疗。但这类治疗方法依然不能有效地控制特殊解剖部位或者特殊病例的牙周炎症，必要时仍需要使用局部药物进行控制。然而，当前局部使用的药物也存在局限性，其虽然有助于控制炎症，但也不利于牙周组织的生长，这是临床治疗的难点，也是需要攻克的临床难题。因此，需要寻求一种行之有效的牙周治疗方法。
2、牙龈卟啉单胞菌(porphyromonas gingivalis，pg)脂多糖(lipopolysaccharide，lps)是牙周病的重要致病因子，可诱导宿主细胞分泌各种炎症因子，导致炎症反应，破坏牙周组织。小分子rnas(micrornas，mirs)是一类长度为20-22个核苷酸的内源性非编码小分子rna，通过与靶基因特异性结合，从而诱导靶基因mrnas的降解或抑制其翻译，在转录后水平上负向调控靶基因的表达，进而影响细胞的生物学特性。有研究表明，一些mirs在控制炎症方面发挥着重要作用，可以为牙周组织再生提供良好的微环境。然而mirs是一种不稳定的、带有相对较高的分子量和负电荷的分子，导致其难以渗透过细胞膜。因此，mirs单独转染的效果差，不可能应用到临床中，而且目前的转染试剂成本高，在组织内的转染效率也较低，比如使用脂质体转染，无法使mirs有效实现在临床中的使用。
3、综上，有必要挖掘具有牙周抗炎作用的mirs，并对其进行改造，
技术实现思路
1、为了克服上述现有技术的不足，本专利技术设计了ha-pei-mir-146a复合材料，利用ha-pei使ha-pei能够成功携带mir-146a进入细胞，且对细胞没有毒性，进而使mir-146a在牙周的临床治疗中发挥抑制炎症的作用。
2、为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：
3、本专利技术第一方面提供了一种ha-pei-mir-146a纳米复合材料的制备方法，该方法包括以下步骤：
4、s1、ha-pei的合成：先将nhs和edc溶于水中，再加入含pei的nacl溶液，50-70℃下搅拌20-40min后，再加入含ha的nacl溶液，继续搅拌20-30h，反应结束后经透析即得；
5、s2、将步骤s1的ha-pei在磷酸盐缓冲盐水中与mir-146a模拟物混合，室温孵育7-15min后即得。
6、优选地，s2所述ha-pei与mir-146a模拟物的用量比为50-60ml:0.9-1mg。
7、优选地，s2所述磷酸盐缓冲盐水的溶剂为pbs，ph为7.0-8.0。
8、优选地，s1所述nhs、edc、pei和ha的质量比为20-24：33-37：13-17：90-110。
9、优选地，s1所述nhs和edc的水溶液、含pei的nacl溶液和含ha的nacl溶液的体积比为2:1:1。
10、优选地，s1所述pei的相对分子量为10000，纯度为99％。
11、优选地，s1所述nacl溶液的浓度为0.4-0.6m。
12、优选地，s1所述透析为透析至产物的电导率与纯水电导率一致。
13、本专利技术第二方面提供了采用第一方面所述的制备方法制备得到的ha-pei-mir-146a纳米复合材料。
14、本专利技术第三方面提供了第二方面所述的ha-pei-mir-146a纳米复合材料在制备牙周炎治疗药物中的应用。
15、采用本专利技术方法构建的ha-pei-mir-146a复合材料，利用ha-pei具有减弱电势、易于细胞内吞、良好的稳定性和靶向性、毒副作用低、生物相容性高、减少体内免疫系统的吞噬等特点，将其与具有抗炎作用的mir-146a结合在一起，使ha-pei能够成功携带mir-146a进入细胞，且对细胞没有毒性，进而使mir-146a在牙周的临床治疗中发挥抑制炎症的作用。
16、优选地，为丰富药物的应用形式，使其适用于不同的范围，所述药物还包括药学上可接受的载体。
17、进一步地，所述载体是药物领域中可接受的功能性药用辅料，包括表面活性剂、助悬剂、乳化剂以及一些新型药用高分子材料，如环糊精、壳聚糖、聚乳酸(pla)、聚乙醇酸聚乳酸共聚物(plga)、透明质酸等。还可以包括稀释剂、黏合剂、润滑剂、崩解剂、助溶剂、稳定剂等赋形剂。
18、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
19、本专利技术经前期研究发现mir-146a具有明显的牙周抗炎作用(xie yf,shu r,jiangsy,song zc,guo qm,dong jc,lin zk.mirna-146negatively regulates the productionof pro-inflammatory cytokines via nf-κb signaling in human gingivalfibroblasts.j inflamm(lond),2014,11(1):38.；jiang sy,xue d,xie yf,zhu dw,dongyy,wei cc,deng jy.the negative feedback regulation of microrna-146a in humanperiodontal ligament cells after porphyromonas gingivalis lipopolysaccharidestimulation.inflamm res,2015,64(6):441-451.)，但由于mir-146a难以渗透过细胞膜，单纯转染效果差，使用脂质体转染，无法有效实现在临床中的使用。为此，本专利技术设计了一种ha-pei-mir-146a复合材料的制备方法，该ha-pei-mir-146a复合材料利用ha-pei具有减弱电势、易于细胞内吞、良好的稳定性和靶向性、毒副作用低、生物相容性高、减少体内免疫系统的吞噬等特点，将其与具有抗炎作用的mir-146a结合在一起，借助ha-pei提高mir-146a的细胞渗透性。进一步研究发现，本专利技术的ha-pei-mir-146a纳米复合材料具有转染容易，转染效果好的优势，能充分发挥mir-146a对牙周的抗炎作用，而且如果能应用到牙周治疗的临床实际中，价格便宜，有利于广泛使用，并切合临床实际需求。
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1.一种HA-PEI-miR-146a纳米复合材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种HA-PEI-miR-146a纳米复合材料的制备方法，其特征在于，S2所述HA-PEI与miR-146a模拟物的用量比为50-60mL:0.9-1mg。
3.根据权利要求1所述的一种HA-PEI-miR-146a纳米复合材料的制备方法，其特征在于，S2所述磷酸盐缓冲盐水的溶剂为PBS，pH为7.0-8.0。
4.根据权利要求1所述的一种HA-PEI-miR-146a纳米复合材料的制备方法，其特征在于，S1所述NHS、EDC、PEI和HA的质量比为20-24：33-37：13-17：90-110。
5.根据权利要求1所述的一种HA-PEI-miR-146a纳米复合材料的制备方法，其特征在于，S1所述NHS和EDC的水溶液、含PEI的NaCl溶液和含HA的NaCl溶液的体积比为2:1:1。
6.根据权利要求1所述的一种HA-PEI-miR-146a纳米复合材料的制备方法，其特征在于，S1所述PEI的相对分子量
7.根据权利要求1所述的一种HA-PEI-miR-146a纳米复合材料的制备方法，其特征在于，S1所述NaCl溶液的浓度为0.4-0.6M。
8.根据权利要求1所述的一种HA-PEI-miR-146a纳米复合材料的制备方法，其特征在于，S1所述透析为透析至产物的电导率与纯水电导率一致。
9.采用权利要求1-8任一项所述的制备方法制备得到的HA-PEI-miR-146a纳米复合材料。
10.权利要求9所述的HA-PEI-miR-146a纳米复合材料在制备牙周炎治疗药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种ha-pei-mir-146a纳米复合材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种ha-pei-mir-146a纳米复合材料的制备方法，其特征在于，s2所述ha-pei与mir-146a模拟物的用量比为50-60ml:0.9-1mg。
3.根据权利要求1所述的一种ha-pei-mir-146a纳米复合材料的制备方法，其特征在于，s2所述磷酸盐缓冲盐水的溶剂为pbs，ph为7.0-8.0。
4.根据权利要求1所述的一种ha-pei-mir-146a纳米复合材料的制备方法，其特征在于，s1所述nhs、edc、pei和ha的质量比为20-24：33-37：13-17：90-110。
5.根据权利要求1所述的一种ha-pei-mir-146a纳米复合材料的制备方法，其特征在于，s1所述nhs...
【专利技术属性】
技术研发人员：蒋少云，黎家君，吴怡，程靖媛，
申请(专利权)人：北京大学深圳医院，
类型：发明
国别省市：
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