【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物，特别是涉及一种检测生物标志物的表达量的试剂在制备评估肾癌预后的产品中的应用、评估肾癌预后的试剂盒。
技术介绍
1、恶性肿瘤严重威胁人类生命健康，肾癌作为恶性程度最高的肾脏疾病之一，是泌尿系统病死率第一的恶性肿瘤。其中，肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma，ccrcc)是肾癌中最常见的病理类型，约占肾癌的总数的75％。术后切除标本病理是诊断ccrcc的金标准，ccrcc对传统放疗和化疗均不敏感，手术是治疗早期局限性ccrcc最重要的方法。然而高达30％的患者在接受完整的肿瘤切除后会出现复发或远处转移，一旦发生转移，患者生存率将从50％以上急剧降低至12％。近年来，随着靶向药物及免疫治疗的发展，晚期转移性ccrcc患者的总体治疗效果和预后得到改善，例如血管内皮生长因子(vegf)抑制剂，包括舒尼替尼、帕唑帕尼、阿昔替尼和卡博替尼等；哺乳动物雷帕霉素靶标(mtor)抑制剂，包括依维莫司和替西罗莫司等；以及免疫检查点抑制剂pd-1/pd-l1抑制剂和ctla-4抑制剂等。然而，相当一部分患者对于靶向或免疫治疗没有获益，约30％的患者会出现原发或继发的耐药性。由此可见，肾癌治疗仍面临巨大挑战，传统的病理组织学分型不足以辅助临床进行有效的预后评估、治疗筛选和全程管理，临床尚缺乏有效鉴别不同预后风险和免疫治疗获益人群的分层指标。即便是病理分型和分期分级相同或相近的ccrcc患者，对药物敏感性和转移风险也存在很大差异。因此，在精准医学模式下，结合ccrcc的分子特征对疾病进一步分类诊断，为
2、然而，肿瘤异质性为肿瘤的精准诊疗带来了巨大挑战。肿瘤异质性指同一种恶性肿瘤存在基因型和表型方面的差异，这种差异体现在两个方面：一是不同患者个体间的差异。这可归因于患者间遗传背景的差异，以及肿瘤组织病理类型、临床分期和细胞分化程度的差异导致的肿瘤演化过程的多样性。二是同一患者体内不同部位肿瘤间的差异，包括原发灶与转移灶间的异质性和同一肿瘤内不同部位间的异质性。此外，肿瘤异质性还在时间和空间两个维度中贯穿肿瘤演进的全部过程，呈现高度复杂性和多样性。这种异质性源自肿瘤组织内存在不同亚型的肿瘤细胞，导致这些肿瘤细胞在基因表达谱、信号网络调控、突变谱以及对治疗的敏感性等方面存在差异，导致对不同抗肿瘤药物的敏感性差异和预后生存差异。肾癌的肿瘤内异质性极高，目前已被广泛研究认知。gerlinger等学者通过肿瘤组织的多点取样高通量测序，首次揭示了ccrcc肿瘤内异质性的存在。研究发现，所有取样标本中45％的基因突变仅为部分肿瘤标本所共有，另外约20％的基因突变存在于单次活检的组织标本中，说明肿瘤遗传是不均匀的，区域差异现象在原发ccrcc肿瘤组织内部普遍存在。shibata等学者的研究发现，晚期ccrcc患者的原发癌和转移癌之间也存在异质性。sankin等人进一步从基因突变角度证实了ccrcc的广泛肿瘤内异质性，研究发现肿瘤中各种复杂的遗传分支都伴随着3个以上突变基因，尤其是与肿瘤进化相关的基因。上述研究从基因组层面揭示了ccrcc存在广泛的肿瘤异质性，并在一定程度上为靶向药物的筛选提供了依据，但是还不足以指导患者的分层诊疗，靶向药物的整体有效率依然有限。原因在于以下几个方面：一是依靠多位点穿刺测序的方式无法覆盖肿瘤全貌，会大大低估肿瘤内异质性；二是基因组学分析主要针对基因靶点突变和拷贝数变异，而肿瘤的发生发展是一个多基因参与、多层面调控的复杂过程。单纯依靠基因组信息无法全面反映肿瘤的细胞表型，也无法预测某种治疗对特定患者的敏感性。三是由于肿瘤时空进化和动态演进的连续性，导致肿瘤细胞表型和基因变异在疾病演变过程中发生快速变化，导致患者发生获得性耐药。
3、因此，有必要采用整合多组学分析的方法，全面理解ccrcc的肿瘤异质性，筛选鉴定预后标志物，构建有效的ccrcc分子分型体系和预后预测模型，指导不同的ccrcc患者的精准治疗策略和临床监测手段。
技术实现思路
1、本申请的目的是提供一种检测生物标志物的表达量的试剂在制备评估肾癌预后的产品中的应用、评估肾癌预后的试剂盒。
2、本申请采用了以下技术方案：
3、本申请第一方面公开了一种检测生物标志物的表达量的试剂在制备评估肾癌预后的产品中的应用，所述表达量包括mrna水平和蛋白质水平的表达量，所述生物标志物包括第一生物标志物和/或第二生物标志物，所述第一生物标志物包括如下基因：fos、junb、egr1、nr4a1、ier2、atf3，所述第二生物标志物包括如下基因的至少一种：slc16a9、slc13a1、cyp4a11、esrrg。需要说明的是，本申请中，生物标志物的表达量包括mrna水平和蛋白质水平两个层面的表达量，需两个层面同时表达量上调或下调，才能够用于预测肾癌患者的预后。
4、本申请的一种实现方式中，检测样本的样本类型为肾癌组织样本，所述肾癌为肾透明细胞癌。
5、本申请的一种实现方式中，所述第一生物标志物表达上调，则肾癌预后较差。需要说明的是，第一生物标志的表达量为第一生物标志中各个基因表达量的平均值。对于第一生物标志物中的各个基因，若所有基因共同表达上调，则具有更佳的预后价值。
6、本申请的一种实现方式中，所述第二生物标志物表达上调，则肾癌预后较好。需要说明的是，第二生物标志的表达量为第二生物标志中各个基因表达量的平均值。还需要说明的是，对于第二生物标志物，slc16a9、slc13a1、cyp4a11和esrrg也可以作为独立预测因子，对肾癌患者的预后进行预测。例如，slc16a9同时在mrna水平和蛋白质水平表达上调，也能够判断患者预后较好。对于第二生物标志物中的各个基因，若slc16a9、slc13a1、cyp4a11和esrrg基因共同表达上调，相较于单独一个基因进行预后预测，具有更佳的预测效果。
7、本申请的一种实现方式中，通过荧光定量pcr法对所述生物标志物的mrna水平的表达量进行检测，若所述生物标志物的ct值减去内参基因的ct值大于等于1，则所述生物标志物在mrna水平表达上调。
8、本申请的一种实现方式中，包括使用以下引物组中的至少一组进行所述荧光定量pcr法的检测：fos上游引物：5′-ggggcaaggtggaacagtta-3′、fos下游引物：5′-ccttcagcaggttggcaat-3′；junb上游引物：5′-cctggacgatctgcacaaga-3′、junb下游引物：5′-ggttggtgtaaacgggaggt-3′；egr1上游引物：5′-cacctgaccgcagagtcttt-3′、egr1下游引物：5′-ctgaccaagctgaagagggg-3′；nr4a1上游引物：5′-ttcctggtgtaagctttggtatgg-3′、nr4a1下游引物：5′-actctggatggaccaacagg-3′；ie本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测生物标志物的表达量的试剂在制备评估肾癌预后的产品中的应用，其特征在于，所述表达量包括mRNA水平和蛋白质水平的表达量，所述生物标志物包括第一生物标志物和/或第二生物标志物，所述第一生物标志物包括如下基因：FOS、JUNB、EGR1、NR4A1、IER2、ATF3，所述第二生物标志物包括如下基因的至少一种：SLC16A9、SLC13A1、CYP4A11、ESRRG。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，检测样本的样本类型为肾癌组织样本，所述肾癌为肾透明细胞癌。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述第一生物标志物表达上调，则肾癌预后较差。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述第二生物标志物表达上调，则肾癌预后较好。
5.根据权利要求1至4任一项所述的应用，其特征在于，通过荧光定量PCR法对所述生物标志物的mRNA水平的表达量进行检测，若所述生物标志物的CT值减去内参基因的CT值大于等于1，则所述生物标志物在mRNA水平表达上调。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，包括使用以下引物
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，通过免疫组织化学法对所述生物标志物的蛋白质水平的表达量进行检测，若所述生物标志物的染色指数大于5，则所述生物标志物在蛋白质水平表达上调。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，若所述第一生物标志物的mRNA水平和蛋白质水平的表达量，均分别高于所述第二生物标志物的mRNA水平和蛋白质水平的表达量，则肾癌预后较差；若所述第二生物标志物的mRNA水平和蛋白质水平的表达量，均分别高于所述第一生物标志物的mRNA水平和蛋白质水平的表达量，则肾癌预后较好。
9.一种评估肾癌预后的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测生物标志物的表达量的试剂，所述生物标志物包括第一生物标志物和/或第二生物标志物，所述第一生物标志物包括如下基因：FOS、JUNB、EGR1、NR4A1、IER2、ATF3，所述第二生物标志物包括如下基因的至少一种：SLC16A9、SLC13A1、CYP4A11、ESRRG。
10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括引物组，所述引物组选自：
...【技术特征摘要】
1.一种检测生物标志物的表达量的试剂在制备评估肾癌预后的产品中的应用，其特征在于，所述表达量包括mrna水平和蛋白质水平的表达量，所述生物标志物包括第一生物标志物和/或第二生物标志物，所述第一生物标志物包括如下基因：fos、junb、egr1、nr4a1、ier2、atf3，所述第二生物标志物包括如下基因的至少一种：slc16a9、slc13a1、cyp4a11、esrrg。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，检测样本的样本类型为肾癌组织样本，所述肾癌为肾透明细胞癌。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述第一生物标志物表达上调，则肾癌预后较差。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述第二生物标志物表达上调，则肾癌预后较好。
5.根据权利要求1至4任一项所述的应用，其特征在于，通过荧光定量pcr法对所述生物标志物的mrna水平的表达量进行检测，若所述生物标志物的ct值减去内参基因的ct值大于等于1，则所述生物标志物在mrna水平表达上调。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，包括使用以下引物组中的至少一组进行所述荧光定量pcr法的检测：fos上游引物：5′-ggggc...
【专利技术属性】
技术研发人员：吕兆洁，毕良宽，黄雷，张学齐，徐梓涵，戴芳，王昒鸣，尹玉新，
申请(专利权)人：北京大学深圳医院，
类型：发明
国别省市：
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