一种猪鼻粘膜上皮细胞分离培养方法技术

本发明专利技术适用于细胞分离培养技术领域，提供了一种猪鼻粘膜上皮细胞分离培养方法。本发明专利技术采用混合酶过夜消化法，有效清除粘膜组织黏液，实现更完全的消化。通过差速贴壁技术，获得纯度较高的猪鼻粘膜上皮细胞。并在首次换液时将培养基更换为含EGF和维生素A的完全培养基，为上皮细胞提供稳定且优良的体外生长环境。该方法不仅快速准确地分离原代细胞，还确保了上皮细胞培养状态的稳定性和优质性。本发明专利技术填补了猪鼻粘膜原代细胞分离研究的空白，旨在构建简单易行、重复性高的原代猪鼻粘膜上皮细胞体外模型，该模型能够模拟猪鼻粘膜的生理学和形态学特征，为呼吸道病原体感染机制、呼吸系统疾病药物筛选和基因疗法等研究提供了可靠的体外实验基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细胞分离培养，尤其涉及一种猪鼻粘膜上皮细胞分离培养方法。

技术介绍

1、鼻腔作为通往呼吸道的门户，是抵御微生物入侵的第一道防线，发挥着关键作用。鼻黏膜上皮细胞是先天免疫的重要组成部分，不仅是经典的物理屏障，还能在其它有害物质(病毒、细菌和过敏原等)介导下，通过调控细胞因子的分泌来阻止炎症的发展，因此鼻粘膜上皮细胞在呼吸道先天性免疫中，以及由此引发的继发性的细胞结构改变和病理变化中起着重要的作用。

2、粘膜免疫系统(mucosal immune system，mis)是机体整个免疫网络的重要组成部分，包括呼吸道粘膜、胃肠粘膜、生殖道粘膜及眼结膜等外分泌腺体，在抵抗感染方面起着积极重要的作用。黏膜免疫是猪体免疫网络的重要组成部分，50％以上的淋巴组织和80％的免疫细胞存在于黏膜，黏膜是猪最大的免疫系统。然而，随着规模化养猪业的不断发展，猪呼吸道疾病日趋严重。鉴于鼻粘膜的复杂性，当前对于呼吸道药物的药动力学特性的研究大多依赖于动物体内模型和体外组织标本来进行，但急需更为适宜的体外研究模型来减少实验动物的使用，以符合“3r原则”。目前，体本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种猪鼻粘膜上皮细胞分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的猪鼻粘膜上皮细胞分离培养方法，其特征在于，所述3抗由青霉素、链霉素和两性霉素B组成，青霉素浓度为100U/ml，链霉素浓度为100μg/ml，两性霉素B浓度为0.25μg/ml。

3.根据权利要求1所述的猪鼻粘膜上皮细胞分离培养方法，其特征在于，所述DMEM/F12培养液的渗透压为280-320mOsm/kg，pH为7.0-7.4。

4.根据权利要求1所述的猪鼻粘膜上皮细胞分离培养方法，其特征在于，所述步骤2中，混合消化酶液由0.5mg/ml胶原酶Ⅰ、0.5mg/...

【技术特征摘要】

1.一种猪鼻粘膜上皮细胞分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的猪鼻粘膜上皮细胞分离培养方法，其特征在于，所述3抗由青霉素、链霉素和两性霉素b组成，青霉素浓度为100u/ml，链霉素浓度为100μg/ml，两性霉素b浓度为0.25μg/ml。

3.根据权利要求1所述的猪鼻粘膜上皮细胞分离培养方法，其特征在于，所述dmem/f12培养液的渗透压为280-320mosm/kg，ph为7.0-7.4。

4.根据权利要求1所述的猪鼻粘膜上皮细胞分离培养方法，其特征在于，所述步骤2中，混合消化酶液由0.5mg/ml胶原酶ⅰ、0.5mg/ml胶原酶ⅳ和0.16mg/ml透明质酸酶组成；混合消化酶液使用体积是猪鼻粘膜组织块体积的3.5-5倍；酶解消化的消化时间为16-18h；酶解消化温度为4℃。

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【专利技术属性】
技术研发人员：李娜，陈红，雷连成，郑雨，李丰阳，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：