鼠源气道类器官炎症模型的构建方法及其应用技术

本发明专利技术公开了鼠源气道类器官炎症模型的构建方法及其应用，涉及生物技术领域。所述的构建方法包括以下步骤：(1)取鼠源气道组织，用消化液消化，离心，得细胞悬液；(2)细胞悬液离心后，弃上清，加入基质胶混匀，孵育，使用气道类器官完全培养基进行培养；(3)向步骤(2)培养得到的细胞中加入细胞回收液进行孵育除胶，离心，弃上清，加入基质胶，混匀，孵育，加入气道类器官完全培养基继续培养；(4)在气道类器官完全培养基中加入1‑20μg/ml LPS，进行孵育。本发明专利技术构建的AO涵盖纤毛细胞、杯状细胞、基底细胞、棒状细胞这四种主要细胞类型，引起了AO中的上皮损伤和AO炎症因子的表达，可为CRD新药开发提供参考。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，具体涉及鼠源气道类器官炎症模型的构建方法及其应用。

技术介绍

1、慢性呼吸道疾病(chronic respiratory disease,crd)，如哮喘、过敏性鼻炎、咽炎、气管炎、慢性阻塞性肺炎，是最常见的非传染性疾病之一。crd具有病程长、反复发作、高病发率和高死亡率的特点。

2、虽然不同呼吸道疾病的触发因素和病理机制略有不同，但均表现为上皮损伤或功能障碍、及组织炎症状态。因此研究气道炎症与上皮细胞功能的关系，对于理解crd的病理生理学，及开发有效的治疗方法至关重要。传统的体内模型和2d细胞培养在模拟气道的复杂结构和细胞相互作用方面存在局限性。随着干细胞生物学和3d培养技术的发展，已经实现了脑、肝、肠、胰腺等多种组织类器官的体外培养。这一技术的突破为在更具生理相关性的环境中模拟crd，研究炎症基础机制提供了强有力的工具。

3、类器官是从干细胞衍生的三维结构，能够自我组装成微型化的器官，并保留关键的结构和功能特征。现有技术中已经探索了数种哺乳动物气道类器官(airway organoid,ao)的构建方法，包括本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种鼠源气道类器官炎症模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中消化液为胶原酶Ⅰ型，所述的胶原酶Ⅰ型的浓度为1-5mg/ml。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)所述的胶原酶Ⅰ型的浓度为2mg/ml。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的气道类器官完全培养基包括Advanced DMEM/F12、2mM/ml Glutamax、10mM/ml HEPES、1％1x PS、1％1x N2、2％1x B27、1mM/ml N-乙酰半胱氨酸、50ng/ml ...

【技术特征摘要】

1.一种鼠源气道类器官炎症模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中消化液为胶原酶ⅰ型，所述的胶原酶ⅰ型的浓度为1-5mg/ml。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)所述的胶原酶ⅰ型的浓度为2mg/ml。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的气道类器官完全培养基包括advanced dmem/f12、2mm/ml glutamax、10mm/ml hepes、1％1x ps、1％1x n2、2％1x b27、1mm/ml n-乙酰半胱氨酸、50ng/ml egf、100ng/ml noggin、500ng/ml r-spondin和10μmy27632。

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【专利技术属性】
技术研发人员：刘文君，王晨萱，孙登龙，樊启贵，李颖萌，詹扬，袁蓉，
申请(专利权)人：江中药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：