一种耐有机溶剂的高活性RNA切割型脱氧核酶及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种耐有机溶剂的高活性RNA切割型脱氧核酶及其应用，本发明专利技术首先在耐受有机溶剂的DNAzyme(E3)基础上建立筛选耐有机溶剂的高活性RNA切割型脱氧核酶的文库，发现了催化活性较高的TJ11‑3，其催化活性为是已公开报道最快的RNA切割型DNAzyme10‑23(k<subgt;cat</subgt;～10min<supgt;‑1</supgt;)的4倍以上；本发明专利技术还进一步构建了靶序列触发的多组分DNAzyme，可用于病原体核酸靶序列的检测，具有较高的安全性和便利性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学，具体涉及一种耐有机溶剂的高活性rna切割型脱氧核酶(rna-cleaving dnazyme)的专利技术及其应用。

技术介绍

1、脱氧核酶(dnazyme)是一类人工合成的具有催化功能的核酸分子主要通过体外筛选(in vitro selection)或定向进化(directed evolution)技术从随机dna文库中分离获得。最早的dnazyme是以pb2+离子为辅助因子从随机dna文库筛选获得，在pb2+存在下催化酯交换反应。目前已发现的dnazyme可以催化包括dna或rna的切割、磷酸化或烷基化等多种反应类型。相比于蛋白酶而言，dnazyme具有分子量小，可化学合成且稳定性高，免疫原性低，可在目标物(如金属离子、小分子或大分子等)刺激下发生催化反应产生信号等优势，因此在生物传感、生物治疗、逻辑运算以及分子器件等领域有广阔应用前景。其中，以具有rna切割活性的dnazyme最引人关注，目前基于dnazyme的重金属离子便携式探测器已成功商业化。

2、rna切割型dnazyme由底物链和酶链组成。底物链除了为完整本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种耐有机溶剂的切割RNA的DNAzyme筛选或设计文库，所述文库基于DNAzyme E3P(5’-AAGTGGTGCCCGGAAAGGGTGACTCA-底物识别区-3’)构建，包括：在E3P的3’和5’端分别引入若干个碱基，与E3P原有的一部分序列一起作为PCR引物识别区、在可变区域引入随机序列，其中E3P的可变区域是指E3P的5’端起第20-26个碱基；

2.耐有机溶剂的切割RNA的DNAzyme，所述DNAzyme包括如下结构：从5’到3’依次包含5’引物识别区，E3P的1-19位的茎环区，E3P的20-26位的可变区，以及位于E3P可变区任选存在的定向进化区(通过...

【技术特征摘要】

1.一种耐有机溶剂的切割rna的dnazyme筛选或设计文库，所述文库基于dnazyme e3p(5’-aagtggtgcccggaaagggtgactca-底物识别区-3’)构建，包括：在e3p的3’和5’端分别引入若干个碱基，与e3p原有的一部分序列一起作为pcr引物识别区、在可变区域引入随机序列，其中e3p的可变区域是指e3p的5’端起第20-26个碱基；

2.耐有机溶剂的切割rna的dnazyme，所述dnazyme包括如下结构：从5’到3’依次包含5’引物识别区，e3p的1-19位的茎环区，e3p的20-26位的可变区，以及位于e3p可变区任选存在的定向进化区(通过体外筛选从随机文库中获得的序列)，底物识别区，任选的3’引物识别...

【专利技术属性】
技术研发人员：邴涛，常天俊，李光平，曹倩倩，李素慧，段巧，梁英，张帅奇，孟辉，谭蔚泓，
申请(专利权)人：中国科学院基础医学与肿瘤研究所筹，
类型：发明
国别省市：