【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体地，涉及一种用于提高体外无细胞蛋白合成活性的基因工程菌株及其在d2p中应用及其制备方法和在d2p中应用。
技术介绍
1、无细胞蛋白质合成(cell-free protein synthesis,cfps)是一种以外源mrna或dna为模板，在体外条件下的使用酶、氨基酸底物和能量来合成蛋白质的技术。与传统的体内重组表达系统相比，体外无细胞合成系统具有多种优点，如能够直接以pcr产物作为模板同时平行合成多种蛋白质，可开展高通量多肽或蛋白质类药物筛选，此外，体外无细胞合成系统在表达对细胞有毒害作用的多肽或蛋白质的应用方面也具有独特优势。无细胞蛋白质表达系统是基于细胞的蛋白质表达系统的重要补充。
2、现有的无细胞蛋白质合成体系主要可以分为两类：其一是将获得的纯化的蛋白质合成所需的核糖体、酶、trna等按一定的比例进行组合复配，使其获得体外表达蛋白质的能力，即纯化的无细胞蛋白质表达系统(pure)。该系统具有清晰的组分信息，可以方便地、定制化地对配方进行调整以获得不同的蛋白质表达特性，但缺点是制备工艺流程复杂且...
【技术保护点】
1.一种用于提高体外无细胞蛋白合成活性的基因工程菌株，其特征在于，所述的基因工程菌株内源的蛋白酶基因被改造，并且，在所述基因工程菌株中蛋白酶基因的表达或活性相比改造前被降低；
2.如权利要求1所述的基因工程菌株，其特征在于，所述“降低”是指将所述蛋白酶基因的表达或活性被降低满足以下条件：B1/B0的比值≤30％；其中，B1为基因工程菌株中蛋白酶基因的表达或活性；B0为所述改造前的蛋白酶基因的表达或活性；优选地，所述“降低”是指将所述蛋白酶基因的表达或活性降低满足以下条件：B1/B0的比值≤10％；更优选地，所述“降低”是指将所述蛋白酶基因的表达或活性降低满...
【技术特征摘要】
1.一种用于提高体外无细胞蛋白合成活性的基因工程菌株，其特征在于，所述的基因工程菌株内源的蛋白酶基因被改造，并且，在所述基因工程菌株中蛋白酶基因的表达或活性相比改造前被降低；
2.如权利要求1所述的基因工程菌株，其特征在于，所述“降低”是指将所述蛋白酶基因的表达或活性被降低满足以下条件：b1/b0的比值≤30％；其中，b1为基因工程菌株中蛋白酶基因的表达或活性；b0为所述改造前的蛋白酶基因的表达或活性；优选地，所述“降低”是指将所述蛋白酶基因的表达或活性降低满足以下条件：b1/b0的比值≤10％；更优选地，所述“降低”是指将所述蛋白酶基因的表达或活性降低满足以下条件：b1/b0的比值≤5％；更优选地，所述“降低”是指将所述蛋白酶基因的表达或活性降低满足以下条件：b1/b0的比值≤2％；更优选地，所述“降低”是指将所述蛋白酶基因的表达或活性降低满足以下条件：b1/b0的比值选自0-2％。
3.如权利要求2所述的基因工程菌株，其特征在于，述基因工程菌株为来源于选自下组的一种或多种来源的酵母：酿酒酵母、毕氏酵母、克鲁维酵母；优选地为克鲁维酵母，更优选地为乳酸克鲁维酵母。
4.如权利要求3所述的基因工程菌株，其特征在于，所述克鲁维酵母为一种或多种类型基因工程改造过的乳酸克鲁维酵母，所述基因工程改造用于提高其体外蛋白表达活性。
5.如权利要求1所述的基因工程菌株，其特征在于，所述的蛋白酶基因选自ape4、ape3、atg4、cps1-4以及atg4中的一种或多...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭敏，熊亮，曹欣茹，于雪，
申请(专利权)人：康码上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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