一种重组毕赤酵母工程菌及其构建方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种重组毕赤酵母工程菌及其构建方法和应用，属于生物化学和基因工程技术领域，重组毕赤酵母工程菌是将SEQ ID NO.1所示的FDH1基因靶向敲除，且插入了SEQ ID NO.3所示的DAK2基因、SEQ ID NO.5所示的SHM2基因、SEQ ID NO.7所示的FBA1基因和SEQ ID NO.9所示的MTD1基因的毕赤酵母菌株；本发明专利技术提供的重组毕赤酵母工程菌能显著提高重组蛋白的产量，特别是针对重组人转铁蛋白、重组人白蛋白、重组人碱性成纤维细胞生长因子等蛋白产量具有较大的提升。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种重组毕赤酵母工程菌及其构建方法和应用，属于生物化学和基因工程。

技术介绍

1、毕赤酵母（pichia pastoris），也称为komagataella phaffii，是一种广泛用于工业蛋白表达和代谢产物生产的宿主菌。它因其在异源蛋白生产方面的优势而被广泛采用，包括食品和饲料酶、抗体和疫苗、化妆品成分以及生物燃料和其他化学品。毕赤酵母的特点包括：1、强大的启动子：毕赤酵母使用如paox和pgap这样的强启动子，确保了精确的基因调控。2、遗传操作的便利性：毕赤酵母具有用户友好的遗传操作能力，这使得基因表达系统的操纵变得更加容易。3、分泌系统：毕赤酵母拥有成熟的分泌系统，能够高效地将蛋白质释放到外部环境中。4、翻译后修饰：毕赤酵母在蛋白质的翻译后修饰方面表现出色，这对于蛋白质的正确折叠和功能至关重要。5、高密度发酵：毕赤酵母能够实现超过150 g/l的高密度发酵，这显著提高了蛋白质的表达量。6、基因编辑技术：crispr/cas9基因编辑系统的出现，使得基因表达系统的操纵更加高效，极大地提高了探索基因功能效率。7、代谢工程：通过在微生物中整本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种重组毕赤酵母工程菌，其特征在于，所述重组毕赤酵母工程菌是将SEQ ID NO.1所示的FDH1基因靶向敲除，且插入了SEQ ID NO.3所示的DAK2基因、SEQ ID NO.5所示的SHM2基因、SEQ ID NO.7所示的FBA1基因和SEQ ID NO.9所示的MTD1基因的毕赤酵母菌株。

2.如权利要求1所述的一种重组毕赤酵母工程菌，其特征在于，所述重组毕赤酵母工程菌还插入了抗药性基因、功能性载体和促进蛋白表达的信号肽，所述抗药性基因包括杀稻瘟菌素Blasticidin抗性基因、遗传霉素G418抗性基因、潮霉素B抗性基因、博来霉素Zeocin抗性基因中的一种...

【技术特征摘要】

1.一种重组毕赤酵母工程菌，其特征在于，所述重组毕赤酵母工程菌是将seq id no.1所示的fdh1基因靶向敲除，且插入了seq id no.3所示的dak2基因、seq id no.5所示的shm2基因、seq id no.7所示的fba1基因和seq id no.9所示的mtd1基因的毕赤酵母菌株。

2.如权利要求1所述的一种重组毕赤酵母工程菌，其特征在于，所述重组毕赤酵母工程菌还插入了抗药性基因、功能性载体和促进蛋白表达的信号肽，所述抗药性基因包括杀稻瘟菌素blasticidin抗性基因、遗传霉素g418抗性基因、潮霉素b抗性基因、博来霉素zeocin抗性基因中的一种或多种；所述功能性载体包括重组人转铁蛋白表达载体、重组人白蛋白表达载体、重组人碱性成纤维细胞生长因子表达载体；所述信号肽的核苷酸序列如seq idno.20所示。

3.权利要求1-2任意一项所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：项炜，韩旭，姜钧茹，于雅媗，龚国利，
申请(专利权)人：通化安睿特生物制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：