一种许氏平鲉精巢细胞系及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种许氏平鲉精巢细胞系及其构建方法和应用，属于海洋鱼类细胞培养技术领域。对许氏平鲉幼鱼精巢组织进行原代培养和传代培养，从而建立了能够长期体外持续传代的许氏平鲉精巢细胞系。本发明专利技术建立的许氏平鲉精巢细胞系呈成纤维状，生长曲线良好，具有较强的增殖能力。其显著表达基质细胞标记基因timp2，慢病毒载体可转染该细胞系，后续可应用于性腺发育相关功能基因的研究。目前，该细胞系已在体外持续传代60余代，且能够进行冷冻保存，复苏存活率高。该细胞系的建立对于鱼类性腺发育基因的研究提供了稳定且优良的实验材料。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于海洋鱼类细胞培养，具体涉及一种许氏平鲉精巢细胞系及其构建方法和应用。

技术介绍

1、许氏平鲉（ sebastes schlegelii），俗称黑头，属硬骨鱼纲、鲉形目、平鲉科、平鲉属。主要分布在我国的黄海、渤海及东海一带，是适应我国北方深远海网箱养殖的优势物种之一。其肉质鲜美，营养价值高，是具有较高开发潜力和研究价值的水中珍品。建立海洋鱼类细胞系对于病毒攻击、基因编辑及转基因技术等提供了良好的实验材料。与体内实验相比，具有重复性高、操作简单、成本低、实验周期短等优点。

2、许氏平鲉具有雌雄生长二态性，同龄雌性个体比雄性个体大25%以上，因此对于性别相关机制的解析显得尤为重要。近年来在许氏平鲉性别决定研究方面，已成功筛选出 amhy雄性性别决定基因，并且克隆出多种性别相关基因。然而，由于缺乏性腺细胞系作为体外实验的材料，使得性别相关基因的研究受到极大限制。同时，有研究表明生殖干细胞的培养需要依托于性腺体细胞系为饲养层，这对于其体外增殖、体外精子发生等具有重本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种许氏平鲉精巢细胞系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的许氏平鲉精巢细胞系的构建方法，其特征在于，步骤（3）包括：

3.根据权利要求1所述的许氏平鲉精巢细胞系的构建方法，其特征在于，步骤（3）包括：

4. 根据权利要求1所述的许氏平鲉精巢细胞系的构建方法，其特征在于，所述的完全培养基为：以L-15培养基为基础培养基，向基础培养基中添加20v/v%胎牛血清、1v/v% MEM非必需氨基酸、1v/v%青链霉素混合液、1 mM丙酮酸钠、2 mM谷氨酰胺、1v/v‰巯基还原剂溶液、1v/v%许氏平鲉胚胎提取物、10 ng/mL...

【技术特征摘要】

1.一种许氏平鲉精巢细胞系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的许氏平鲉精巢细胞系的构建方法，其特征在于，步骤（3）包括：

3.根据权利要求1所述的许氏平鲉精巢细胞系的构建方法，其特征在于，步骤（3）包括：

4. 根据权利要求1所述的许氏平鲉精巢细胞系的构建方法，其特征在于，所述的完全培养基为：以l-15培养基为基础培养基，向基础培养基中添加20v/v%胎牛血清、1v/v% mem非必需氨基酸、1v/v%青链霉素混合液、1 mm丙酮酸钠、2 mm谷氨酰胺、1v/v‰巯基还原剂溶液、1v/v%许氏平鲉胚胎提取物、10 ng/ml 碱性成纤维细胞生长因子、20 ng/ml表皮生长因子。

5.根据权利要求1所述的许氏平鲉精巢细胞系的构建方法，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺艳，高向玉，宋宗诚，宋伟豪，岳新璐，齐洁，张全启，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：