一种核酸构建物及其应用方法技术

本发明专利技术提供一种用于提高核糖体展示效率的核酸构建物，所述核酸构建物包含前导肽的编码序列、目标分子序列、间隔序列、聚氨基酸序列、茎环状结构序列等结构，该核酸构建物能够使得核糖体上mRNA在翻译时及时停止，并增强“mRNA‑核糖体‑蛋白质”三元复合物的稳定性，提高了目的蛋白或基因的富集效果，提升了核糖体展示技术整体的筛选效率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及一种用于提高核糖体展示效率的核酸构建物，以及含有该核酸构建物的质粒、基因工程细胞，和利用该核酸构建物进行核糖体展示的方法等。

技术介绍

1、功能性蛋白作为能够识别和特异性结合其他分子的活性蛋白，在疾病治疗尤其是一些免疫疾病、癌症等重大疾病的治疗中，起着非常重要的作用，在医药领域中越来越多的引起人们的关注。目前常见的功能性蛋白有抗体、多肽、酶等，抗体类药物靶向性好，治疗效果显著，副作用小，需求越来越大。因而抗体药物制备中的关键技术之一--抗体筛选技术也显得越发重要。目前较常应用的抗体筛选技术的有杂交瘤技术、抗体文库筛选技术、纳米抗体技术和转基因小鼠抗体筛选技术等。其中抗体文库筛选又分为噬菌体展示筛选技术、酵母表面展示技术、核糖体展示技术和mrna展示筛选技术等。

2、核糖体展示技术(ribosome display technology,rdt)是一种利用功能性蛋白相互作用进行筛选的新技术，它将正确折叠的蛋白及其mrna同时结合在核糖体上，形成“mrna-核糖体-蛋白质”三元复合物，使目的蛋白的基因型和表型联系起来，之本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于核糖体展示的核酸构建物，其特征在于：所述核酸构建物具有从5’至3’的式(I)结构：

2.根据权利要求1所述的用于核糖体展示的核酸构建物，所述的标签蛋白选自下组：6His、8His以及链霉亲和素STN中的任意一种或多种的组合；优选的，所述的标签蛋白选择8His或6His；

3.根据权利要求1所述的用于核糖体展示的核酸构建物，所述前导肽序列具有如SEQNO.1所示的序列，或者具有与SEQ NO.1所示氨基酸序列≥80％的一致性且具有与SEQ NO.1所示的序列相同的活性；

4.根据权利要求1所述的用于核糖体展示的核酸构建物，所述外源蛋白来自动物...

【技术特征摘要】

1.一种用于核糖体展示的核酸构建物，其特征在于：所述核酸构建物具有从5’至3’的式(i)结构：

2.根据权利要求1所述的用于核糖体展示的核酸构建物，所述的标签蛋白选自下组：6his、8his以及链霉亲和素stn中的任意一种或多种的组合；优选的，所述的标签蛋白选择8his或6his；

3.根据权利要求1所述的用于核糖体展示的核酸构建物，所述前导肽序列具有如seqno.1所示的序列，或者具有与seq no.1所示氨基酸序列≥80％的一致性且具有与seq no.1所示的序列相同的活性；

4.根据权利要求1所述的用于核糖体展示的核酸构建物，所述外源蛋白来自动物、植物、病原体，优选来自哺乳动物；更优选地，所述外源蛋白的编码序列来自灵长动物或啮齿动物，包括人、小鼠、大鼠。

5.根据权利要求1或4所述的用于核糖体展示的核酸构建物，所述外源蛋白为根据实际筛选需求确定的功能性蛋白，包括但不限于以下列举的任意一种或多种组合：荧光素蛋白、或荧光素酶、绿色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、氨酰trna合成酶、甘油醛-3磷酸脱氢酶、过氧化氢酶、肌动蛋白、抗体的可变区域、α-淀粉酶、肠道菌素a、丙型肝炎病毒e2糖蛋白、胰岛素前体、干扰素αa、白细胞介素-1β、溶菌酶素、血清白蛋白、单链抗体、甲状腺素运载蛋白、酪氨酸酶、木聚糖酶。

6.根据权利要求1-4任一项所述的用于核糖体展示的核酸构建物，所述的标签蛋白序列与外源蛋白的编码序列间包含一连接序列linker 1；优选的所述linker 1具有如seqno.8所示的序列。

【专利技术属性】
技术研发人员：郭敏，徐丽琼，邓密妮，唐瑞娟，于雪，
申请(专利权)人：康码上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：