一种基于免疫沉淀技术富集DNA甲基化片段的方法技术

本发明专利技术涉及一种基于免疫沉淀技术富集DNA甲基化片段的方法。本发明专利技术通过优化磁珠‑抗体‑核酸结合环境以及添加适量的修饰λDNA作为DNA甲基化保护剂，采用竞争性结合的方式，减少由于抗体自身原因所带来的非特异性结合，优化洗涤步骤，采用不同盐离子浓度梯度洗涤磁珠抗体核酸结合物，降低非特异性富集，有效提高了甲基化基因的结合效率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医药领域，更具体地，涉及一种基于免疫沉淀技术富集dna甲基化片段的方法。

技术介绍

1、dna甲基化一般指基因组cpg中胞嘧啶5号碳位的甲基化状态。作为重要的表观遗传学调控机制，在发育、疾病进展中扮演着重要的作用。dna甲基化异常是癌症发生和发展的重要早期事件。

2、在正常人类的dna中，2％～7％的胞嘧啶被甲基化，其中cpg是最重要的甲基化位点，它在基因组中呈现不均匀分布，存在高甲基化、低甲基化和非甲基化区域。在基因组的某些区域，如基因的promoter(启动子区)、5’utr(非翻译区)和第一个exon(外显子)cpg的序列密度非常高。一般情况下，启动子区dna高甲基化与基因沉默相关，而低甲基化则与基因的活化相关联。大量的研究表明，抑癌基因的失活与该基因的启动子区域cpg岛过度甲基化有直接联系，从而导致癌症的发生。

3、针对基因组甲基化分析，目前主要是通过亚硫酸盐处理的方式。采用重亚硫酸盐处理样本dna，将dna中未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶，经pcr扩增后进一步变成胸腺嘧啶，而原本甲基化c则保持不变，从而有效本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于免疫沉淀技术富集DNA甲基化片段的方法，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中，DNA甲基化保护剂中，甲基化λDNA：非甲基化λDNA的质量比为1:1；

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S2中，混合时，免疫沉淀缓冲液和添加λDNA的样本的体积比为(30-35)μL：(55-60)μL。

4.如权利要求1的方法，其特征在于，步骤S3中，还包括磁珠的清洗步骤和抗体的稀释步骤：

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤S3中，抗体、磁珠、步骤S2得到的混合液按照以下体积比混合：1:1:(15...

【技术特征摘要】

1.一种基于免疫沉淀技术富集dna甲基化片段的方法，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤s1中，dna甲基化保护剂中，甲基化λdna：非甲基化λdna的质量比为1:1；

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤s2中，混合时，免疫沉淀缓冲液和添加λdna的样本的体积比为(30-35)μl：(55-60)μl。

4.如权利要求1的方法，其特征在于，步骤s3中，还包括磁珠的清洗步骤和抗体的稀释步骤：

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤s3中，抗体、磁珠、步骤s2得到的混合液按照以下体积比混合：1:1:(15-20)...

【专利技术属性】
技术研发人员：王美丛，王冬旭，张笑笑，周旭建，万佳渭，宫亚楠，谢伟娟，李维政，
申请(专利权)人：浙江默乐生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：