植物可视化无痕编辑载体及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了植物可视化无痕编辑载体及其构建方法和应用。所述植物可视化无痕编辑载体以pCAMBIA0380载体为基本骨架，在该基本骨架中依次插入重组酶系统、基因编辑系统与可视化系统；所述的重组酶系统由热诱导启动子、重组酶FLP基因和终止子组成；所述的基因编辑系统采用Csy4‑Cleavable Cassettes系统；所述的可视化系统采用RUBY系统。本发明专利技术进一步公开了构建所述植物可视化无痕编辑载体的方法。本发明专利技术提供的植物可视化无痕编辑载体可有效提高阳性植株的筛选效率以及转基因载体元件删除的检测效率，在编辑植物基因、研究植物基因功能或培育植物新品种等方面具有应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物基因编辑载体，尤其涉及植物可视化无痕编辑载体及其构建方法和应用，属于植物基因编辑载体及其应用领域。

技术介绍

1、“外源基因清除”技术综合利用了两套位点特异重组酶的元件，即来源于细菌噬菌体的cre/loxp系统和来自于酵母的flp/frt系统，这两套系统均通过重组酶识别特定的重组位点将插入该位点间的所有外源基因删除。“外源基因清除”技术使用了新颖的识别位点，即一个loxp和frt的融合识别位点lf(loxp-frt)，产生了一个全新的高效基因清除系统。当热激蛋白启动子驱动重组酶基因 flp表达时，重组酶蛋白flp识别融合识别位点lf，两个lf融合识别位点之间的所有目的基因和标记基因dna序列由于发生重组而被切除，这些被切除的序列在细胞中会自动代谢降解。随着基因编辑技术的不断进步和完善，crispr/cas9系统已在杨树、拟南芥、烟草和多种农作物品种的分子设计育种中得到了成功应用。西南大学罗克明教授团队和美国佐治亚大学chung-jui tsai团队分别证实了crispr/cas9技术可应用于杨树这一高大乔木的基本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.植物可视化无痕编辑载体，其特征在于，以pCAMBIA0380载体为基本骨架，将该基本骨架的LB T-DNA repeat与RB T-DNA repeatz之间的原有序列删去后依次插入第一组重组酶识别位点LoxP::FRT、重组酶系统、基因编辑系统、可视化系统以及第二组重组酶识别位点LoxP::FRT。

2.根据权利要求1所述的植物可视化无痕编辑载体，其特征在于，所述pCAMBIA0380载体的基本骨架中的Bsa I酶切位点被删去或突变；所述第一组重组酶识别位点LoxP::FRT或第二组重组酶识别位点LoxP::FRT的识别序列的核苷酸序列为SEQ ID No.38所示。<...

【技术特征摘要】

1.植物可视化无痕编辑载体，其特征在于，以pcambia0380载体为基本骨架，将该基本骨架的lb t-dna repeat与rb t-dna repeatz之间的原有序列删去后依次插入第一组重组酶识别位点loxp::frt、重组酶系统、基因编辑系统、可视化系统以及第二组重组酶识别位点loxp::frt。

2.根据权利要求1所述的植物可视化无痕编辑载体，其特征在于，所述pcambia0380载体的基本骨架中的bsa i酶切位点被删去或突变；所述第一组重组酶识别位点loxp::frt或第二组重组酶识别位点loxp::frt的识别序列的核苷酸序列为seq id no.38所示。

3.根据权利要求1所述的植物可视化无痕编辑载体，其特征在于，所述的重组酶系统由热诱导启动子、重组酶flp基因和nos终止子组成；其中，所述的重组酶flp基因是根据适合杨树基因组的密码子偏好进行优化得到的优化基因，其核苷酸序列为seq id no.1所示。

4.根据权利要求1所述的植物可视化无痕编辑载体，其特征在于，所述的基因编辑系统采用csy4-cleavable cassettes系统；其中，所述的csy4-cleavable cassettes系统由35s启动子、csy4、p2a、ptcas9、 hspt、 cmylcvp、sgrna多克隆位点和35s终止子依次组成。

5.根据权利要求4所述的植物可视化无痕编辑载体，其特征在于，所述的ptcas9的基因是根据适合杨树基因组的密码子偏好进行优化得到的优化基因，其核苷酸序列为seq idno.2所示。

6.根据权利要求1所述的植物可视化无痕编辑载体，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：安新民，吴茹茜，秦德彬，李影，陈婷婷，齐婉芯，李方晴，柴英辉，姜波，牛琳琳，
申请(专利权)人：北京林业大学，
类型：发明
国别省市：