【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因检测核酸分子快速检测，尤其涉及基于恒温扩增加试纸条的多靶标核酸检测装置及检测方法。
技术介绍
1、等温扩增技术(rpa、raa、era、mi ra、lamp、rca等)可以对待检样本核酸进行大规模靶标分子扩增富集，最佳反应温度一般在37℃至65℃范围内，扩增速度快，10-30min就能完成扩增反应，扩增后会产生大量的核酸靶标分子，容易形成核酸气溶胶污染，扩增后产物有两种不同的检测技术方案：1、基于nfo探针法：原本体系中的引物分别用fam基团和生物素基团标记过，形成产物后fam基团和生物素基团结合在一起(形成完整的报告分子)，然后用核酸检测试纸条进行层析，有靶标基因的形成了两端同时带有fam基团和生物素基团的产物，核酸检测试纸条上层析会形成两条带(c线和t线)，如果没有靶标分子，则体系中没有两端同时带有fam基团和生物素基团的产物，核酸检测试纸条条上层析检测时只会显示一条带(c线)；2、基于cri spr检测法：通过等温扩增得到大量的靶标分子，靶标分子与crrna特异性结合后激活cas酶切割活性，然后将反应体系里的reporter切割，切割后的reporter分子在cri spr专用核酸检测试纸条上层析会形成两条带(c线和t线)，相反如果没有靶标分子，则无法激活cas酶的切割特性，完整的reporter在cri spr专用核酸核酸检测试纸条上层析检测时只会显示一条带(c线)，从而实现对靶标分子的检测。
2、恒温扩增加试纸条检测技术具有抗原检测技术的便捷性和qpcr检测技术的灵敏性或(和)基因编辑的特
3、目前常用的技术手段是等温扩增后的反应液体系用10倍左右的稀释液稀释后开插入核酸检测试纸条层析显色，该过程需要将等温扩增反应体系暴露在空气中，等温扩增产生的大量核酸气溶胶分子会进入到环境中，从而导致环境中大量的核酸气溶胶污染，这些气溶胶分子导致后面的检测出现假阳性的概率大大升高，影响其他检测的检测结果。同时这些实验操作需要操作者配制酶反应体系，这个操作需要用到移液器和试剂耗材，对操作者技术要求和知识水平要求高，难度大，操作过程繁琐。一些工程师开发了针对恒温扩增加试纸条检测技术的装置，但一次性只能检测一个靶标，获得检测结果的信息太少，不利于后续应用开发，同时操作依然不够流程化自动化便捷化，对于相关技术和产品进入家庭自测依然是一个障碍。
技术实现思路
1、本专利技术的主要目的在于提供基于恒温扩增加试纸条的多靶标核酸检测装置及检测方法，旨在解决现有的技术问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了基于恒温扩增加试纸条的多靶标核酸检测装置，包括：
3、酶反应和试纸条检测组件，所述酶反应和试纸条检测组件被配置为形成液体能够流动的密封腔室，形成的所述密封腔室包括酶反应仓、稀释液注射仓和试纸条侧流层析仓，所述酶反应仓、稀释液注射仓和试纸条侧流层析仓通过液体通道实现恒温扩增酶反应、酶反应产物稀释和侧流层析。
4、进一步地，所述酶反应仓内预置磁力搅拌子，所述酶反应仓上部设有预置酶反应冻干球的冻干球保存孔，所述冻干球保存孔与酶反应仓通过斜通道相连，且所述冻干球保存孔与酶反应仓通过橡胶管塞分隔，所述酶反应仓上部设有样本核酸释放和加样模块，所述样本核酸释放和加样模块插入后与酶反应仓形成密封空间。
5、进一步地，所述稀释液注射仓由圆柱套筒和注射活塞形成腔室，所述腔室上部通过管道与酶反应仓连接，所述腔室与酶反应仓之间的连接在橡胶管塞插入时被阻断，在所述样本核酸释放和加样模块插入时连通；
6、所述腔室提前预置稀释液，所述稀释液在样本核酸释放和加样模块插入时，在注射活塞推动下可顺着连通管道进入酶反应仓将酶反应液稀释。
7、进一步地，所述试纸条侧流层析仓由试纸条卡垂直插入酶反应和试纸条检测组件主体形成密闭腔室，所述试纸条卡由试纸条下底板、试纸条和带透明观察窗的上盖板卡紧形成，所述试纸条侧流层析仓与酶反应仓通过管道连接，在酶反应液被稀释液稀释进入试纸条侧流层析仓后，与试纸条样本结合垫结合，在试纸条上完成侧流层析和条带显示。
8、进一步地，所述样本核酸释放和加样模块包括两端均呈开口的管体、贴合固定安装在管体一端的能挤压变形的橡胶件以及可拆卸螺纹式安装在管体另一端的端盖，所述端盖上固定安装有出液机构。
9、进一步地，还包括恒温扩增孵育混匀组件，用于为酶反应和试纸条检测组件提供酶反应恒温孵育温度且磁力搅拌酶反应液，所述恒温扩增孵育混匀组件包括，
10、半导体恒温加热片，其在通电情况下形成预设预设37-65℃的恒定孵育温度；
11、混匀装置，设于半导体恒温加热片正下方，包括安装有磁片的磁片托和微型电机，在通电时形成转动磁场，所述转动磁场带动酶反应仓中磁力搅拌子转动；以及，
12、顶杆，设于所述稀释液注射仓正下方，被配置为顶杆安装在偏心轮上，所述偏心轮由电机驱动，当所述恒温扩增孵育混匀组件孵育时间完成时，电机驱动偏心轮转动带动顶杆往上移动，所述顶杆能驱动稀释液注射仓的活塞推动稀释液进入酶反应仓。
13、进一步地，还包括隔膜套，所述隔膜套嵌设于试纸条下底板的凹槽内，且所述隔膜套一端呈开口状，所述隔膜套上具有条形口，所述条形口通过漂浮膜翻转封闭，所述条形口的尺寸大于试纸条的尺寸，所述漂浮膜边沿与所述隔膜套叠合设置，且所述漂浮膜跟随上盖板的上推逐渐贴附于所述隔膜套上。
14、进一步地，所述试纸条下底板上设有容纳替换隔膜套的容纳仓，所述容纳仓端部设有棉辊，所述棉辊呈潮湿状，所述隔膜套由容纳仓向下抽拉时经过棉辊使外表面粘附水分，并在进入试纸条下底板的凹槽内贴附定位，其中，所述隔膜套端部具有抽拉部。
15、进一步地，所述隔膜套的开口端呈内宽外窄状，所述容纳仓端部出口端高度低于所述试纸条下底板的凹槽端部高度。
16、基于恒温扩增加试纸条的多靶标核酸检测方法，采用如上述的多靶标核酸检测装置，具体包括以下步骤，
17、将恒温扩增孵育混匀组件通电，对半导体恒温加热片进行预热；
18、取下酶反应和试纸条检测组件的酶反应仓的橡胶管塞，反应试剂体系冻干球落入酶反应仓和磁力搅拌子在一起，加入含启动剂的反应液，在酶反应仓上方插入样本核酸释放和加样模块，挤压样本核酸释放和加样模块的橡胶件到底加入待测样本；
19、将所述加入样本的酶反应和试纸条检测组件沿恒温扩增孵育混匀组件上部凸起半导体恒温加热片卡紧；
20、按下恒温扩增孵育混匀组件开关，温度和时间倒计时开始显示，混匀装置开始运行，磁力搅拌子在转动磁场作用下在酶反应仓转动，将试剂充分混匀；
21、恒温扩增结束后，所述恒温扩增孵育混匀组件中的顶杆在内部本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.基于恒温扩增加试纸条的多靶标核酸检测装置，其特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的基于恒温扩增加试纸条的多靶标核酸检测装置，其特征在于：所述酶反应仓(100)内预置磁力搅拌子(101)，所述酶反应仓(100)上部设有预置酶反应冻干球的冻干球保存孔(102)，所述冻干球保存孔(102)与酶反应仓(100)通过斜通道相连，且所述冻干球保存孔(102)与酶反应仓(100)通过橡胶管塞(104)分隔，所述酶反应仓(100)上部设有样本核酸释放和加样模块(103)，所述样本核酸释放和加样模块(103)插入后与酶反应仓(100)形成密封空间。
3.如权利要求2所述的基于恒温扩增加试纸条的多靶标核酸检测装置，其特征在于：所述稀释液注射仓(200)由圆柱套筒(201)和注射活塞(202)形成腔室，所述腔室上部通过管道与酶反应仓(100)连接，所述腔室与酶反应仓(100)之间的连接在橡胶管塞(104)插入时被阻断，在所述样本核酸释放和加样模块(103)插入时连通；
4.如权利要求2所述的基于恒温扩增加试纸条的多靶标核酸检测装置，其特征在于：所述试纸条侧流层
5.如权利要求2所述的基于恒温扩增加试纸条的多靶标核酸检测装置，其特征在于：所述样本核酸释放和加样模块(103)包括两端均呈开口的管体、贴合固定安装在管体一端的能挤压变形的橡胶件以及可拆卸螺纹式安装在管体另一端的端盖，所述端盖上固定安装有出液机构。
6.如权利要求2所述的基于恒温扩增加试纸条的多靶标核酸检测装置，其特征在于：还包括恒温扩增孵育混匀组件(400)，用于为酶反应和试纸条检测组件提供酶反应恒温孵育温度且磁力搅拌酶反应液，所述恒温扩增孵育混匀组件(400)包括，
7.如权利要求4所述的基于恒温扩增加试纸条的多靶标核酸检测装置，其特征在于：还包括隔膜套(305)，所述隔膜套(305)嵌设于试纸条下底板(301)的凹槽内，且所述隔膜套(305)一端呈开口状，所述隔膜套(305)上具有条形口，所述条形口通过漂浮膜(306)翻转封闭，所述条形口的尺寸大于试纸条(302)的尺寸，所述漂浮膜(306)边沿与所述隔膜套(305)叠合设置，且所述漂浮膜(306)跟随上盖板(303)的上推逐渐贴附于所述隔膜套(305)上。
8.如权利要求7所述的基于恒温扩增加试纸条的多靶标核酸检测装置，其特征在于：所述试纸条下底板(301)上设有容纳替换隔膜套(305)的容纳仓(307)，所述容纳仓(307)端部设有棉辊(308)，所述棉辊(308)呈潮湿状，所述隔膜套(305)由容纳仓(307)向下抽拉时经过棉辊(308)使外表面粘附水分，并在进入试纸条下底板(301)的凹槽内贴附定位，其中，所述隔膜套(305)端部具有抽拉部。
9.如权利要求8所述的基于恒温扩增加试纸条的多靶标核酸检测装置，其特征在于：所述隔膜套(305)的开口端呈内宽外窄状，所述容纳仓(307)端部出口端高度低于所述试纸条下底板(301)的凹槽端部高度。
10.基于恒温扩增加试纸条的多靶标核酸检测方法，采用如权利要求1-9任一项所述的多靶标核酸检测装置，其特征在于：具体包括以下步骤，
...【技术特征摘要】
1.基于恒温扩增加试纸条的多靶标核酸检测装置，其特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的基于恒温扩增加试纸条的多靶标核酸检测装置，其特征在于：所述酶反应仓(100)内预置磁力搅拌子(101)，所述酶反应仓(100)上部设有预置酶反应冻干球的冻干球保存孔(102)，所述冻干球保存孔(102)与酶反应仓(100)通过斜通道相连，且所述冻干球保存孔(102)与酶反应仓(100)通过橡胶管塞(104)分隔，所述酶反应仓(100)上部设有样本核酸释放和加样模块(103)，所述样本核酸释放和加样模块(103)插入后与酶反应仓(100)形成密封空间。
3.如权利要求2所述的基于恒温扩增加试纸条的多靶标核酸检测装置，其特征在于：所述稀释液注射仓(200)由圆柱套筒(201)和注射活塞(202)形成腔室，所述腔室上部通过管道与酶反应仓(100)连接，所述腔室与酶反应仓(100)之间的连接在橡胶管塞(104)插入时被阻断，在所述样本核酸释放和加样模块(103)插入时连通；
4.如权利要求2所述的基于恒温扩增加试纸条的多靶标核酸检测装置，其特征在于：所述试纸条侧流层析仓(300)由试纸条卡(304)垂直插入酶反应和试纸条检测组件主体形成密闭腔室，所述试纸条卡(304)由试纸条下底板(301)、试纸条(302)和带透明观察窗的上盖板(303)卡紧形成，所述试纸条侧流层析仓(300)与酶反应仓(100)通过管道连接，在酶反应液被稀释液稀释进入试纸条侧流层析仓(300)后，与试纸条(302)样本结合垫结合，在试纸条(302)上完成侧流层析和条带显示。
5.如权利要求2所述的基于恒温扩增加试纸条的多靶标核酸检测装置，其特征在于：所述样本核酸释放和加样模块(103)包括两端均呈开口的管体、贴合固定安装在管体一端的能...
【专利技术属性】
技术研发人员：张鸿，洪杰，王晓波，董靖，李斗斗，吴云波，
申请(专利权)人：芜湖森爱驰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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