一种白花蛇细胞外囊泡及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种白花蛇细胞外囊泡的制备方法，所述制备方法如下：取白花蛇组织加入酶解液进行酶解，粗滤，梯度离心，过滤除杂，再将滤液进行超高速离心，收集所得沉淀即为白花蛇细胞外囊泡。本发明专利技术成功从白花蛇组织中提取出了结构清晰、边缘完整的细胞外囊泡；整体制备方法简单，无需复杂设备，采用酶解离心等方式，没有用到化学试剂，安全无污染。制备的白花蛇细胞外囊泡能够成功转染进入血管内皮细胞内部、显著促进HUVEC细胞增殖、抑制HUVEC细胞凋亡、促进细胞迁移和侵袭能力，起到有效防治心血管疾病的作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及一种白花蛇细胞外囊泡及其制备方法和应用。

技术介绍

1、心血管疾病包括冠心病、脑血管疾病、静脉血栓和肺栓塞等，在全球范围内心血管疾病患者死亡率占全部死亡原因的40％以上。随着人口老龄化进程逐渐加快，每年大约有1790万患者死于心血管疾病(who报道)，且发病率仍在逐年升高。不健康的生活方式，压力过大、肥胖、吸烟、饮酒、熬夜以及重油、重盐饮食等不良生活习惯都会导致心血管疾病发病率增加和逐渐趋于年轻化。

2、白花蛇是一种具有浓郁特色的药材，能够祛风通络、定惊止痉。现代药理研究表明，白花蛇还能够抗炎镇痛、抗肿瘤、免疫调节。中国专利cn1457827a公开了一种瘫消康胶囊具有治疗心血管中风后遗症的效果，其由多种中药材进行炮制、共研细末过筛、灭菌消毒、装制等工艺程序精制而成，其中就包括了白花蛇。但是其原料种类繁多、作用机制不明，无法得知具体功能因子，这对后续精准制药而言存在一定难度。

3、因此，亟需针对白花蛇这一特色药材进行研究，寻找出其中具体功能因子，这对于提升药效，精准制药而言显得极为重要。

<本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种白花蛇细胞外囊泡的制备方法，其特征在于，所述制备方法如下：取白花蛇组织加入酶解液进行酶解，粗滤，梯度离心，过滤除杂，再将滤液进行超高速离心，收集所得沉淀即为白花蛇细胞外囊泡。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酶解液中包括胶原酶D、核酸内切酶。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述胶原酶D浓度为1～5mg/mL，所述核酸内切酶浓度为0.5～3mg/mL。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述白花蛇组织与酶解液的料液比为1：(3～5)；在酶解前用PBS溶液浸泡软化白花蛇组织，酶解时间为0.5～3h，酶解温度为35～...

【技术特征摘要】

1.一种白花蛇细胞外囊泡的制备方法，其特征在于，所述制备方法如下：取白花蛇组织加入酶解液进行酶解，粗滤，梯度离心，过滤除杂，再将滤液进行超高速离心，收集所得沉淀即为白花蛇细胞外囊泡。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酶解液中包括胶原酶d、核酸内切酶。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述胶原酶d浓度为1～5mg/ml，所述核酸内切酶浓度为0.5～3mg/ml。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述白花蛇组织与酶解液的料液比为1：(3～5)；在酶解前用pbs溶液浸泡软化白花蛇组织，酶解时间为0.5～3h，酶解温度为35～39℃。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度离心具体步骤如下：先以800～1200g离心5～15min，取上清，然后以2500～3500g离心25～35min，取上清，最后以10000g～15000g...

【专利技术属性】
技术研发人员：高洋，骆锟，詹雷雷，
申请(专利权)人：蕲泰和瑞生物科技武汉有限公司，
类型：发明
国别省市：