一种肝前体细胞体外扩增的方法技术

本发明专利技术公开了一种肝前体细胞的体外扩增培养方法，本发明专利技术用I型胶原蛋白、层粘连蛋白或纤连蛋白代替了基质胶，对细胞培养板进行包被，所述细胞能够在该包被条件下扩增，所述细胞能够在该包被条件下高表达肝前体细胞标志基因CK19和CK7，低或常规表达成熟肝细胞标志基因ALB和HNF4A，较好的维持肝前体细胞的基因表达特性。与常规基质胶包被相比，本发明专利技术的操作更加简便，成本更加低廉，同时应用更加安全。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，尤其涉及一种肝前体细胞体外扩增的方法。

技术介绍

1、原位肝移植是终末期肝病患者和部分肝脏代谢缺陷患者的首选治疗方案。然而，肝移植存在创伤大、免疫排斥高发、术后门静脉高压和胆道并发症发生风险高及费用昂贵等问题，尤其是供体器官的短缺，使其临床应用受到很大的限制。近些年研究者们尝试利用肝细胞移植替代整肝移植，并已经在临床和动物模型中验证了其有效性。相比于传统的肝移植治疗，肝细胞移植有诸多优点：(1)治疗简单化。肝细胞移植可通过注射完成，易于操作，对受者的损害较小。(2)方便取用。肝细胞可以冷冻保存以备紧急情况使用。(3)可反复移植。为维持肝功能稳定，可进行多次细胞输注。(4)成本降低。细胞移植的成本相较于器官移植显著减少。(5)供体多样性。动物实验证明，从不适宜器官移植的病肝或异种动物身上提取的肝细胞仍然可以移植。(6)风险降低。可使用自体细胞进行移植，降低了免疫排斥的风险。然而，人类肝细胞的应用也受限于供体肝脏的短缺。因此，研究移植肝细胞的可用和可再生来源是非常有必要和迫切的。

2、原代肝细胞具有最佳的肝细胞功能，是肝细胞移植本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种肝前体细胞的体外扩增培养方法，其特征在于：用I型胶原蛋白、层粘连蛋白或纤连蛋白对细胞培养板进行包被，肝前体细胞能够在该包被条件下与重编程培养基共同作用，以实现肝前体细胞的体外扩增，并高表达肝前体细胞标志基因CK19和CK7，低或常规表达成熟肝细胞标志基因ALB和HNF4A，较好的维持肝前体细胞的基因表达特性。

2.根据权利要求1所述的肝前体细胞的体外扩增培养方法，其特征在于：重编程培养基包括基础培养基和添加组分；基础培养基包括Advanced DMEM/F12、低糖DMEM或高糖DMEM中的任意一种；所述添加组分包括表皮生长因子EGF、肝细胞生长因子HGF、CHIR ...

【技术特征摘要】

1.一种肝前体细胞的体外扩增培养方法，其特征在于：用i型胶原蛋白、层粘连蛋白或纤连蛋白对细胞培养板进行包被，肝前体细胞能够在该包被条件下与重编程培养基共同作用，以实现肝前体细胞的体外扩增，并高表达肝前体细胞标志基因ck19和ck7，低或常规表达成熟肝细胞标志基因alb和hnf4a，较好的维持肝前体细胞的基因表达特性。

2.根据权利要求1所述的肝前体细胞的体外扩增培养方法，其特征在于：重编程培养基包括基础培养基和添加组分；基础培养基包括advanced dmem/f12、低糖dmem或高糖dmem中的任意一种；所述添加组分包括表皮生长因子egf、肝细胞生长因子hgf、chir 99021、y27632、鞘氨醇磷酸盐s1p、溶血磷脂酸lpa、a83 01、胎牛血清、n2添加物或b27添加物中的一种或多种的组合。

3.根据权利要求1所述的肝前体细胞的体外扩增培养方法，其特征在于：所述低糖dmem中的葡萄糖浓度为0.5-1.5g/l，所述高糖dmem中的葡萄糖浓度为3.5-6g/l；所述表皮生长因子egf的浓度为15-25ng/ml，所述肝细胞生长因子hgf的浓度为15-25ng/ml，所述chir99021的浓度为2-4μm，所述y 27632的浓度为7-12μm，所述鞘氨醇磷酸盐s1p的浓度为0.7-2μm，所述lpa的浓度为3-7μm，所述a83 01的浓度为0.7-2μm，所述胎牛血清的浓度为5-12％，所述n2...

【专利技术属性】
技术研发人员：白硕，李蕊，菅红磊，
申请(专利权)人：中国科学院过程工程研究所，
类型：发明
国别省市：