一种基于噬菌体磁性材料捕获和释放循环肿瘤细胞的方法技术

一种基于噬菌体磁性材料捕获和释放循环肿瘤细胞的方法，属于生物材料技术领域，本发明专利技术以M13噬菌体为支架，pIII蛋白基因展示组氨酸连接磁球，pVIII蛋白通过点击反应修饰MUC1适配体用于捕获和释放循环肿瘤细胞。制备的M13噬菌体磁性材料对CTC的捕获效率达到95.63％，释放效率为89.98％，细胞活性达到97.14％。相比利用单价适配体直接修饰的传统方法，该体系在全血中的捕获效率提高了46.4％，释放效率提高35％。M13噬菌体磁性材料还可以用于实际乳腺癌样本中的诊断和对不同乳腺癌的亚型进行区分，对EpCAM阴性细胞也有很好的捕获性能，大大降低CTC的漏检率和假阴性结果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物材料，具体涉及一种基于噬菌体磁性材料捕获和释放循环肿瘤细胞的方法。

技术介绍

1、循环肿瘤细胞(circulation tumor cell，ctc)，是由癌细胞从原发肿瘤组织脱落到血液循环中造成肿瘤循环扩散的肿瘤细胞，携带了与癌症的诊断、治疗有关的重要信息，因此可作为癌症早期诊断的重要标志物。然而，ctc在全血中的数量极少，在1ml全血中有数十亿的红细胞和数百万的白细胞，仅有几个到几十个ctc。同时ctc在不同肿瘤或同一肿瘤的不同位置还具有较强的异质性，这都为癌症早期检测富集ctc的平台带来了巨大困难。因此，高效富集、特异性检测以及高纯度捕获ctc是癌症早期诊断的关键。

2、近年来，基于抗体偶联磁性纳米材料广泛应用于全血中ctc的捕获。然而，抗体分子作为细胞标志物分子种类数量极少，常用的抗上皮细胞粘附分子(epcam)抗体也受限于细胞的异质性而影响对ctc的识别和富集。而核酸适配体作为一种新型识别分子与靶标分子具有亲和力高，体积小，识别蛋白种类多和稳定性好等优点，有着作为抗体替代识别配体的巨大潜力。因此，如何以合适的方法修饰本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种M13噬菌体磁性材料的制备方法，其特征在于按如下步骤进行：

2.根据权利要求1所述的一种M13噬菌体磁性材料的制备方法，其特征在于所述N3-M13的合成步骤中，将1～100μL滴度为1×1011pfu/mL～8×1013pfu/mL的6His-M13噬菌体溶于150～300μL 10～100mM的无菌pH 7～8PBS缓冲溶液中混匀，加入100～200μL 5～20mM的NHS-PEG-N3溶液，均匀混合。

3.根据权利要求1所述的一种M13噬菌体磁性材料的制备方法，其特征在于所述M13-MB的制备步骤中，取1～5mg/mL IDA-MBs存储液，用5～2...

【技术特征摘要】

1.一种m13噬菌体磁性材料的制备方法，其特征在于按如下步骤进行：

2.根据权利要求1所述的一种m13噬菌体磁性材料的制备方法，其特征在于所述n3-m13的合成步骤中，将1～100μl滴度为1×1011pfu/ml～8×1013pfu/ml的6his-m13噬菌体溶于150～300μl 10～100mm的无菌ph 7～8pbs缓冲溶液中混匀，加入100～200μl 5～20mm的nhs-peg-n3溶液，均匀混合。

3.根据权利要求1所述的一种m13噬菌体磁性材料的制备方法，其特征在于所述m13-mb的制备步骤中，取1～5mg/ml ida-mbs存储液，用5～20mm pbst缓冲溶液洗三次，磁分离后重悬在pbst溶液中；加入纯化的1×109pfu～1×1012pfu n3-m13溶液；所述pbst缓冲...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨婷，王建华，李慧达，
申请(专利权)人：东北大学，
类型：发明
国别省市：