一种基于293F表达系统的突变型PfuSso7d DNA聚合酶及其制备方法和应用技术方案

本发明专利技术涉及聚合酶技术领域，具体是涉及一种基于293F表达系统的突变型PfuSso7d DNA聚合酶及其制备方法和应用。本发明专利技术的突变型PfuSso7d DNA聚合酶由野生型Pfu DNA聚合酶进行六个位点突变，并在突变体N末端通过六个氨基酸融合非特异性DNA双链结合蛋白Sso7d获得，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术得到的突变型PfuSso7d DNA聚合酶具有高热稳定性、高延伸速率，无细菌DNA残留的特点，在面对长片段、高GC含量的模板依然能够扩增，并且能够耐受多种聚合酶抑制剂，可适用于快速、高效且精确的分子检测或细菌检测中，具有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及聚合酶，具体是涉及一种基于293f表达系统的突变型pfusso7d dna聚合酶及其制备方法和应用。

技术介绍

1、pfu dna聚合酶是最常用的高保真聚合酶之一，极高的保真性使pfu dna 聚合酶在dna扩增、测序和医药等领域发挥着至关重要的作用。但其扩增速率较低，在制备过程中容易引入细菌dna残留，而这些聚合酶中残留的细菌dna在pcr检测中会和靶标竞争聚合酶降低了pcr的效率，甚至导致非特异性扩增严重影响结果的判读。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本专利技术提供一种基于293f表达系统的突变型pfusso7d dna聚合酶及其制备方法和应用，该突变型pfusso7d dna聚合酶具有高热稳定性、高延伸速率，无细菌 dna残留的特点，具有广泛的应用前景。

2、为实现上述目的，本专利技术第一方面提供一种突变型pfusso7d dna聚合酶，其氨基酸序列如seq id no.1所示。

3、seq id no.1：

4、mildvdyiteegkpvi本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种突变型PfuSso7d DNA聚合酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的一种突变型PfuSso7d DNA聚合酶，其特征在于，所述突变型PfuSso7d DNA聚合酶由野生型Pfu DNA聚合酶进行六个位点突变，并在突变体N末端通过六个氨基酸融合非特异性DNA双链结合蛋白Sso7d，最后通过293F表达获得。

3.根据权利要求2所述的一种突变型PfuSso7d DNA聚合酶，其特征在于，所述突变位点为：Y403A、P411H、V438K、A741S、R757Q、S768K；所述氨基酸为Gly-Thr-Gly-G...

【技术特征摘要】

1.一种突变型pfusso7d dna聚合酶，其特征在于，其氨基酸序列如seq id no.1所示。

2.根据权利要求1所述的一种突变型pfusso7d dna聚合酶，其特征在于，所述突变型pfusso7d dna聚合酶由野生型pfu dna聚合酶进行六个位点突变，并在突变体n末端通过六个氨基酸融合非特异性dna双链结合蛋白sso7d，最后通过293f表达获得。

3.根据权利要求2所述的一种突变型pfusso7d dna聚合酶，其特征在于，所述突变位点为：y403a、p411h、v438k、a741s、r757q、s768k；所述氨基酸为gly-thr-gly-gly-gly-gly。

4.一种编码权利要求1-3任一项所述的突变型pfusso7d dna聚合酶的dna分子，其特征在于，其碱基序列如seq id no.2所示。

5.一种重组表达载体，其特征在于，包含有权利要求4所述的突变型pfusso7d dna聚合酶的dna分子。

6.如权利要求1-3任一项所述的突变型pfusso7d dna聚合酶、权利要求5所述的重组表达载体在制备分子检测试剂盒或细菌检测试剂盒中的应用。

7.一种如权利要求1-...

【专利技术属性】
技术研发人员：李红良，张鑫，姚新欣，胡宇峰，程旭，刘志安，
申请(专利权)人：赣南创新与转化医学研究院，
类型：发明
国别省市：