一种实时荧光PCR检测大鼠细小病毒KRV株的方法及应用技术

本发明专利技术涉及实时荧光PCR检测分析技术领域，特别是涉及一种实时荧光PCR检测大鼠细小病毒KRV株的方法及应用，包括以下步骤：(1)样本前处理：以大鼠脏器组织、盲肠内容物或粪便、血液、拭子和细胞培养物为实验动物检测样本，加入相同体积生理盐水制成匀浆，离心，收集上清液待检；血液和腹水直接用于检测；(2)病毒的提取：取上述200μL处理好的样本采用诺唯赞公司的FastPure Viral DNA/RNA Mini Kit(RC311‑01)试剂盒进行病毒提取，取适量终产物样本病毒作为后续模板；(3)使用本发明专利技术设计的特异性引物与TaqMan探针进行实时荧光定量PCR扩增，采集荧光信号并进行分析判定。

【技术实现步骤摘要】

本申请属于实时荧光pcr检测分析，尤其涉及一种实时荧光pcr检测大鼠细小病毒krv株的方法及应用。

技术介绍

1、大鼠细小病毒krv株由kilham等1959年首次从患肿瘤的大鼠体内分离到，是一组小(15至30nm)dna的动物病毒，称为kilham大鼠病毒(kilham rat virus，krv)，属于细小病毒属。krv最初于20世纪50年代末从大鼠肉瘤中分离出来，与其他血清型存在较大差异，结果显示其作为正常大鼠的潜伏感染广泛传播。注射到新生仓鼠，该病毒可产生急性致命疾病或特定畸形的生长和发育；孕鼠感染krv后会被胎儿吸收，导致部分或全部胎儿死亡；幼鼠感染后会出现包括共济失调、黄疸、腹泻或突然性死亡等症状；成年大鼠感染多呈隐性经过，但部分也会出现被毛逆立、脱水和阴囊发绀等症状。krv已列入实验动物国家标准gb/t14926.31-2022实验大鼠病毒检测的必检项目。

2、现有实验动物大鼠细小病毒krv株检测方法为pcr检测技术，pcr检测技术是指利用pcr(聚合酶链式反应)技术对特定dna序列或基因进行扩增和检测的过程，是一种体外扩增dna本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种大鼠细小病毒KRV株的荧光定量PCR检测试剂，其特征在于：包括引物对和探针，所述引物对的核苷酸序列如下所示：

2.如权利要求1所述的一种大鼠细小病毒KRV株的荧光定量PCR检测试剂，其特征在于：所述探针的核苷酸序列如下：

3.如权利要求1所述的一种大鼠细小病毒KRV株的荧光定量PCR检测试剂，其特征在于：还包括：包含KRV序列的KRV-1000g阳性对照品。

4.一种根据权利要求1-3任一项所述的荧光定量PCR检测试剂于大鼠细小病毒KRV株实时荧光PCR检测技术中的应用。

5.一种实时荧光PCR检测大鼠细小病毒KRV株的方法，其特征...

【技术特征摘要】

1.一种大鼠细小病毒krv株的荧光定量pcr检测试剂，其特征在于：包括引物对和探针，所述引物对的核苷酸序列如下所示：

2.如权利要求1所述的一种大鼠细小病毒krv株的荧光定量pcr检测试剂，其特征在于：所述探针的核苷酸序列如下：

3.如权利要求1所述的一种大鼠细小病毒krv株的荧光定量pcr检测试剂，其特征在于：还包括：包含krv序列的krv-1000g阳性对照品。

4.一种根据权利要求1-3任一项所述的荧光定量pcr检测试剂于大鼠细小病毒krv株实时荧光pcr检测技术中的应用。

5.一种实时荧光pcr检测大鼠细小病毒krv株的方法，其特征在于：包括以下步骤：

6.如权利要求5所述的一种实时荧光pcr检测大鼠细小病毒krv株的方法，其特征在于：所述荧光定量pcr扩增的体系为：2×aceq u+qpcr probe master mix 10μl、10μmol/l的正反向引物各0.8μl、10μmol/l的taqman探针0...

【专利技术属性】
技术研发人员：李红良，张鑫，王周祥，严庆，张贵慰，罗莉妍，
申请(专利权)人：赣南创新与转化医学研究院，
类型：发明
国别省市：