一种脐带间充质干细胞外泌体的培养分离方法及培养基技术

本申请公开了一种脐带间充质干细胞外泌体的培养分离方法及培养基，涉及生物技术领域，具体包括如下步骤：S1.细胞培养：将脐带间充质干细胞接种于培养瓶中，接种密度为1×10<supgt;4</supgt;cells/cm<supgt;2</supgt;；加入10ml配制好的外泌体分泌培养基；S2.外泌体收集：当细胞融合度达到80％‑90％时，收集培养上清液；S3.外泌体分离：初步离心；次级离心；超速离心，收集沉淀物，即为外泌体沉淀；用PBS重悬外泌体沉淀，置于‑70～‑80℃环境下保存；解决了细胞培养过程中铁离子供应不稳定，影响外泌体的产量和纯度，避免过量或不足对细胞造成的不利影响，提高外泌体的产量和纯度，增强了制备过程的精确性和可控性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，尤其涉及一种脐带间充质干细胞外泌体的培养分离方法及培养基。

技术介绍

1、外泌体(exosomes)是由细胞分泌的直径在30-150nm之间的膜囊泡，包含多种蛋白质、脂质和rna分子，对细胞间通讯和物质交换具有重要作用。外泌体主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中，外泌体含有其来源细胞的胞膜和胞质蛋白成分，因此它较易与邻近细胞的胞膜发生融合，进而将一个细胞的胞膜及胞质蛋白传递给另一个细胞，在不同细胞间进行信息传递。此外泌体还包含着能够在细胞间进行转移的rna(mrna及micrornas)，通过在细胞间水平转移方式激活靶细胞产生一系列生物学效应。因此，外泌体在细胞微环境中具有十分重要的作用。

2、间充质干细胞(mesenchymal stem cellsmscs)是具有自我更新和多向分化能力的细胞，研究发现间充质干细胞分泌的外泌体中含有丙酮酸激酶、人乳脂肪球egf因子蛋白、跨膜四蛋白等多种蛋白质，他们在参与细胞结构的维持运动信息交流以及组织的修复与再生方面产生着重要作用。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种脐带间充质干细胞外泌体的培养分离方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的脐带间充质干细胞外泌体的培养分离方法，其特征在于，所述培养基按重量份计，具体包括以下成分：基础培养基80-90份，胎牛血清8-12份，抗生素0.5-1.5份，生长因子0.003-0.3份，维生素C 0.1-0.4份，L-谷氨酰胺1.5-3份，外泌体分泌促进剂1.5-1.8份，饱和负载的转铁蛋白0.06-0.3份。

3.如权利要求2所述的脐带间充质干细胞外泌体的培养分离方法，其特征在于，所述外泌体分泌促进剂包括脂质体、鞘磷脂、胆固醇其中一种或多种的组合；

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【技术特征摘要】

1.一种脐带间充质干细胞外泌体的培养分离方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的脐带间充质干细胞外泌体的培养分离方法，其特征在于，所述培养基按重量份计，具体包括以下成分：基础培养基80-90份，胎牛血清8-12份，抗生素0.5-1.5份，生长因子0.003-0.3份，维生素c 0.1-0.4份，l-谷氨酰胺1.5-3份，外泌体分泌促进剂1.5-1.8份，饱和负载的转铁蛋白0.06-0.3份。

3.如权利要求2所述的脐带间充质干细胞外泌体的培养分离方法，其特征在于，所述外泌体分泌促进剂包括脂质体、鞘磷脂、胆固醇其中一种或多种的组合；

4.如权利要求3所述的脐带间充质干细胞外泌体的培养分离方法，其特征在于，步骤s1中检测初始的硝酸铁浓度计为x0；从第三天起每间隔12小时，从培养基中取样，检测样品中硝酸铁的含量，计为x1……xn，计算硝酸铁用量，并补充至x0含量的95％。

5.如权利要求4所述的脐带间充质干细胞外泌体的培养分离方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：赖金林，罗华英，
申请(专利权)人：中乔健工生物科技广东有限公司，
类型：发明
国别省市：