【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、腺相关病毒(aav)颗粒因其良好的安全性概况、高治疗功效和靶标特异性工程化的可能性，通常用作用于研究和临床方法中的基因转移媒介物。对于重组生产，需要准确且稳健的用于病毒载体表征的分析方法。通常，载体基因组滴定是通过微滴式数字pcr(ddpcr)进行的，这是一种对核酸进行绝对定量的方法。
2、在文献中，针对实时和微滴式数字pcr二者，报道了几种用于aav载体基因组滴定的预处理方法。在对衣壳内的靶序列进行绝对定量之前，需要用核酸酶如dna酶i降解游离瞬时质粒和其他未包装的核酸(如宿主细胞dna)(zolotukhin,s.等人1999；furuta-hanawa,b.等人2019；fripont,s.等人2019；dobnik,d.等人2019；sanmiguel j.等人2019)。此外，衣壳需要被降解以获得更好的载体基因组可及性。aav颗粒的热灭活以及随之产生的其衣壳蛋白的变性足以达到此目的(wang,y.,等人2019)。然而，在大多数公开中，描述了用蛋白酶k进行额外的蛋白质消化(zolotukhin,s....
【技术保护点】
1.一种用于确定样品中病毒基因组DNA拷贝数的方法，其中所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的方法，其中将所述经消化的样品稀释最多2.5倍以用于与蛋白酶K一起的所述孵育。
4.根据权利要求2至3中任一项所述的方法，其中将全部经消化的样品与蛋白酶K一起孵育。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述方法在至高95℃的温度进行，除了所述数字微滴式聚合酶链式反应的最终延伸步骤之外。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中在所述孵育...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于确定样品中病毒基因组dna拷贝数的方法，其中所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的方法，其中将所述经消化的样品稀释最多2.5倍以用于与蛋白酶k一起的所述孵育。
4.根据权利要求2至3中任一项所述的方法，其中将全部经消化的样品与蛋白酶k一起孵育。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述方法在至高95℃的温度进行，除了所述数字微滴式聚合酶链式反应的最终延伸步骤之外。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中在所述孵育中采用的蛋白酶k的总量为15mu至35mu。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述样品的体积为约10μl。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中与蛋白酶k一起的所述孵育在100μl的总体积中进行。
9.根据权利要求2至8中任一项所述的方法，其中所述核酸酶为dna酶i。
10.根据权利要求2至9中任一项所述的方法，其中在所述孵育中采用的核酸酶的总量为约5u。
11.根据权利要求2至10中任一项所述的方法，其中与所述核酸酶一起的所述孵育在50μl的总体积中进行。...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·奥尔，A·梅茨格，M·波普，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：
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