一种Cas9蛋白突变体及在基因编辑技术中的应用制造技术

技术编号:43364469 阅读:30 留言:0更新日期:2024-11-19 17:47
本发明专利技术提供了一种Cas9蛋白突变体,表达所述Cas9蛋白突变体的载体以及使用所述载体进行基因编辑的方法。本发明专利技术提供的Cas9蛋白突变体在毕赤酵母中展现出比野生型更高的适应性和基因编辑效率,对靶基因的编辑概率均达到90%以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术公开了一种属于蛋白突变体及基因编辑技术。


技术介绍

1、规律成簇的间隔短回文重复(clustered regularly interspaced shortpalindromic repeats, crispr)/crispr相关蛋白9(crispr-associated protein 9,cas9)是一种能在基因组特定位点引入碱基插入、缺失或替换而纠正有害碱基突变或破坏致病基因的高效且精准的基因编辑技术。相比于另外两种碱基水平上的基因编辑技术——锌指核酸酶(zinc-finger nucleases,zfns)和转录激活样效应因子核酸酶(transcription activator-like effector nucleases,talens),crispr/cas9系统的构建更简单、高效、低成本,在应用时只需改变grna的靶向序列即可编程目标基因,被广泛应用至细胞基因改造、动物模型构建、药物高通量筛选等领域。该系统由能发挥核酸切割活性的cas9蛋白和能起到引导作用的grna两部分组成,cas9在grna的引导下到达指定的位点以行驶切割活性本文档来自技高网...

【技术保护点】

1. 一种Cas9蛋白突变体,其特征在于,所述Cas9蛋白突变体为在SEQ ID NO.1的序列中具有D276N、A421T、A1184T的突变体。

2.一种编码权利要求1所述Cas9蛋白突变体的多核苷酸。

3. 根据权利要求2所述的多核苷酸,其特征在于,所述多核苷酸的序列如SEQ ID NO.4所示。

4.一种表达权利要求1所述Cas9蛋白突变体的载体,其特征在于,所述载体含有权利要求2或3所述的多核苷酸。

5.一种应用权利要求4所述的载体进行基因编辑的方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:

6.根据权利要求5所述的方法,其...

【技术特征摘要】

1. 一种cas9蛋白突变体,其特征在于,所述cas9蛋白突变体为在seq id no.1的序列中具有d276n、a421t、a1184t的突变体。

2.一种编码权利要求1所述cas9蛋白突变体的多核苷酸。

3. 根据权利要求2所述的多核苷酸,其特征在于,所述多核苷酸的序列如seq id no.4所示。

4.一种表达权利要求1所述cas9蛋白突变体的载体,其特征在于,所述载体含有权利要求2或3所述的多核苷酸。

5.一种应用权利要求4所述的载体进行基因编辑的方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:

【专利技术属性】
技术研发人员:张晓鹏胡暄张小鹃刘嘉航刘曦雨卢醒
申请(专利权)人:中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
类型:发明
国别省市:

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