一种IFNAR1和/或IFNAR2基因修饰的非人动物制造技术

本发明专利技术提供一种表达人或嵌合(例如，人源化)IFNAR1和/或IFNAR2蛋白的非人动物及其构建方法和应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术提供一种表达人或嵌合(例如，人源化)ifnar1和/或ifnar2蛋白的非人动物及其构建方法和在生物医药领域的应用。

技术介绍

1、传统的药物研发通常使用体外筛选方法，然而这些筛选方法无法提供机体环境(如肿瘤微环境、基质细胞、细胞外基质成分和免疫细胞相互作用等)，导致药物开发失败率较高。此外，鉴于人与动物之间的差异，使用常规实验动物进行体内药理试验获得的试验结果可能无法反映真实的疾病状态和靶向部位的相互作用，导致许多临床试验的结果与动物实验结果存在显著差异。

2、因此，开发适合人抗体筛选和评价的人源化动物模型将显著提高新药开发效率，降低药物研发成本。

3、但是，人源化动物模型的构建十分困难，例如非专利文献：generation andutility of genetically humanized mouse models(scheer n,snaith m,wolf cr,seibler j.,drug discovery today；18(23-24):1200-11,2013)公开了任何基因的人源化都带有一定的风险，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基因修饰的非人动物的构建方法，其特征在于，所述非人动物的基因组包含至少一条染色体，所述染色体包含编码人或嵌合Ⅰ型干扰素受体1(IFNAR1)蛋白的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述编码人或嵌合IFNAR1蛋白的核苷酸序列可操作地连接至至少一条染色体的内源IFNAR1基因座的内源调控元件(如，内源5’UTR和/或3’UTR)。

3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，所述嵌合IFNAR1蛋白包含人或人源化的胞外区、内源的跨膜区和内源的胞质区；优选还包括内源的信号肽。

4.根据权利要求1-3任一所述的构建方法...

【技术特征摘要】

1.一种基因修饰的非人动物的构建方法，其特征在于，所述非人动物的基因组包含至少一条染色体，所述染色体包含编码人或嵌合ⅰ型干扰素受体1(ifnar1)蛋白的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述编码人或嵌合ifnar1蛋白的核苷酸序列可操作地连接至至少一条染色体的内源ifnar1基因座的内源调控元件(如，内源5’utr和/或3’utr)。

3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，所述嵌合ifnar1蛋白包含人或人源化的胞外区、内源的跨膜区和内源的胞质区；优选还包括内源的信号肽。

4.根据权利要求1-3任一所述的构建方法，其特征在于，所述人或嵌合ifnar1蛋白的氨基酸序列包括seq id no：2第28-430或28-436位，或包含与seq id no：2第28-430或28-436位氨基酸同一性至少为70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或99.5％。

5.根据权利要求1-4任一所述的构建方法，其特征在于，所述嵌合ifnar1蛋白的氨基酸序列包含seq id no：7，或包含与seq id no：7同一性至少为70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或99.5％。

6.一种基因修饰的非人动物的构建方法，其特征在于，在非人动物内源ifnar1基因座处，用包含人ifnar1的核苷酸序列替换内源ifnar1基因的相应区域。

7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述人ifnar1的核苷酸序列包含人ifnar1基因外显子2的部分至外显子9的部分；优选的，外显子2的部分至少包括5bp连续核苷酸序列；外显子9的部分至少包括5bp连续核苷酸序列；

8.根据权利要求6或7所述的构建方法，其特征在于，所述内源ifnar1基因的相应区域包含非人动物ifnar1基因外显子2的部分至外显子9的部分；或者，所述内源ifnar1基因的相应区域包含非人动物编码ifnar1胞外区的核苷酸序列。

9.根据权利要求6-8任一所述的构建方法，其特征在于，所述人ifnar1的核苷酸序列可操作地连接至内源ifnar1调控元件，如，启动子；

10.根据权利要求1-9任一所述的构建方法，其特征在于，所述非人动物为哺乳动物，如，猴子、啮齿动物；优选的，所述啮齿动物为小鼠或大鼠。

11.根据权利要求1-10任一所述的构建方法，其特征在于，所述非人动物的基因组中修饰的ifnar1基因转录的mrna包含seq id no：6，或包含与seq id no：6所示核苷酸序列同一性至少为70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或99.5％。

12.根据权利要求1-11任一所述的构建方法，其特征在于，所述非人动物还包括其他基因编码的人或嵌合蛋白的核苷酸序列，所述人或嵌合蛋白选自ifnar2、lag3、4-1bb、cd40、tigit、cd27、cd28、b7h3、ox40、pd-1、pd-l1和ctla4中的至少一种。

13.一种基因修饰的非人动物的构建方法，其特征在于，所述非人动物的基因组包含至少一条染色体，所述染色体包含编码人或嵌合ⅰ型干扰素受体2(ifnar2)蛋白的核苷酸序列。

14.根据权利要求13所述的构建方法，其特征在于，所述编码人或嵌合ifnar2蛋白的核苷酸序列可操作地连接至至少一条染色体的内源ifnar2基因座的内源调控元件(如，内源5’utr和/或3’utr)。

15.根据权利要求13或14所述的构建方法，其特征在于，所述嵌合ifnar2蛋白包含人或人源化的胞外区、内源的跨膜区和内源的胞质区；优选还包括人或人源化的信号肽。

16.根据权利要求13-15任一所述的构建方法，其特征在于，所述人或嵌合ifnar2蛋白的氨基酸序列包含seq id no：22第1-243或1-242位，或包含与seq id no：22第1-243或1-242位氨基酸同一性至少为70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或99.5％。

17.根据权利要求13-16任一所述的构建方法，其特征在于，所述嵌合ifnar2蛋白的氨基酸序列包含seq id no：29或58，或包含与seq id no：29或58同一性至少为70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或99.5％。

18.一种基因修饰的非人动物的构建方法，其特征在于，在非人动物内源ifnar2基因座处，导入包含人ifnar2的核苷酸序列。

19.根据权利要求18所述的构建方法，其特征在于，所述人ifnar2的核苷酸序列包含人ifnar2基因外显子2的部分至外显子8的部分；优选的，外显子2的部分包含至少5bp连续核苷酸序列；优选的，外显子8的...

【专利技术属性】
技术研发人员：王琳琳，张淑金，王淑峰，
申请(专利权)人：百奥赛图北京医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：