一种基于新分子靶标同时检测多种致病菌的多重qPCR试剂盒及方法技术

本发明专利技术属于微生物分子检测领域，公开了一种同时检测多种致病菌的多重qPCR试剂盒及方法。发明专利技术人针对沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌和阪崎克罗诺杆菌基因组各自的新特异性基因片段以及大肠埃希氏菌O157:H7特异性较高的rfbE基因，优化设计得到的多重qPCR引物探针组具有很高的特异性，仅对四种目标菌在特异性的荧光信号通道检测出现荧光信号，检测结果更加准确。本发明专利技术的多重qPCR检测试剂盒10 h内即可完成单管内四种致病菌的高灵敏度检测，其中qPCR全过程仅需约1 h，检测灵敏度可低至1.9～12 CFU/Test，显著提高了检测效率、降低了检测成本，特别适用于大规模样品的摸底排查和实际检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物分子检测领域，具体涉及一种同时检测多种致病菌的多重qpcr试剂盒及方法，特别涉及一种基于特异性基因组片段同时检测沙门氏菌、大肠埃希氏菌o157:h7、单核细胞增生李斯特氏菌和阪崎克罗诺杆菌的多重qpcr试剂盒及方法。

技术介绍

1、近年来，食源性疾病频发，严重威胁公众健康，并给社会造成巨大的经济损失。根据世界卫生组织2018年食源性疾病调查报告，全球感染食源性疾病人数超过6亿，死亡人数42万，其中由食源性病原菌导致死亡人数超23万。

2、沙门氏菌(salmonella)是肠杆菌科中一种重要的人畜共患的革兰氏阴性病原菌。感染后可引起发热、恶心、呕吐、腹泻等一系列症状，使人发生食物中毒，严重时甚至可以危及生命。据统计在世界各国的各类细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首。我国也以沙门氏菌为首位。

3、单核细胞增生李斯特氏菌(listeria monocytogenes)是一种兼性厌氧的人畜共患病原菌，感染宿主后可引起脑膜炎、败血症、神经系统损伤和流产等症状，病死率高达30％，易感染人群包括老年人、孕妇、婴儿本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种同时检测多种致病菌的多重qPCR引物探针组，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的多重qPCR引物组，其特征在于，所述探针包括：

3.根据权利要求2所述的多重qPCR探针组，其特征在于，不同的核酸探针连接的淬灭基团和荧光基团对不同。

4.根据权利要求3所述的多重qPCR探针组，其特征在于，沙门氏菌对应的核酸探针的5’端标记有荧光基团ROX，3’端标记有淬灭基团BHQ2；

5.一种同时检测多种致病菌的多重qPCR试剂盒，其特征在于，含有权利要求1～4任一项所述的多重qPCR引物和探针组。

6.根据权利要求5所述的多重...

【技术特征摘要】

1.一种同时检测多种致病菌的多重qpcr引物探针组，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的多重qpcr引物组，其特征在于，所述探针包括：

3.根据权利要求2所述的多重qpcr探针组，其特征在于，不同的核酸探针连接的淬灭基团和荧光基团对不同。

4.根据权利要求3所述的多重qpcr探针组，其特征在于，沙门氏菌对应的核酸探针的5’端标记有荧光基团rox，3’端标记有淬灭基团bhq2；

5.一种同时检测多种致病菌的多重qpcr试剂盒，其特征在于，含有权利要求1～4任一项所述的多重qpcr引物和探针组。

6.根据权利要求5所述的多重qpcr试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括预混液，所述预混液的组成包括：2× qpcr mix，沙门氏菌的上下游引物及探针、大肠埃希氏菌o157:h7的上下游引物及探针、单核细胞增生李斯特氏菌的上下游引物及探针和阪崎克罗诺杆菌的上下游引物及探针，每种上游引物的浓度为0.40 µmol/l、下游引物的浓度为0.40 µmol/l；沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌及阪崎克罗...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴毓薇，冯燕梅，吴清平，赵昕宇，叶青华，王涓，万强，蒋富凤，蔡芷荷，黄嘉慧，黄惠书，曲晓莹，张健伟，潘紫英，周聪煜，
申请(专利权)人：广东环凯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：