一种用于修复OTOF基因p.Q829X突变的单碱基编辑系统及其应用技术方案

本发明专利技术公开了一种用于修复OTOF基因p.Q829X突变的单碱基编辑系统及其应用。所述单碱基编辑系统包括：腺嘌呤碱基编辑器和sgRNA，所述sgRNA的靶向序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术通过纯合Otof<supgt;Q828X/Q828X</supgt;小鼠模型实验评价了该系统对小鼠听力损失的影响。结果发现，该系统能特异靶向Otof<supgt;Q828X/Q828X</supgt;小鼠内毛细胞对点突变进行有效修复，成功地纠正了C>T的突变，且在长达一年的观察期内，持续检测到听力恢复至野生型水平，同时观察到otoferlin蛋白表达和内毛细胞持续囊泡释放功能的恢复，直观地验证了该系统对OTOF(c.2482C>T，p.Q828X)突变基因导致的听神经病的治疗和/或预防作用，能够用于制备治疗和/或预防听神经病的药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学领域、医药领域，具体涉及一种用于修复otof基因p.q829x突变的单碱基编辑系统及其应用。

技术介绍

1、遗传性耳聋是一种常见的感觉障碍性疾病，据统计，每年约有0.2％的新生儿患有耳聋，其中约60％的患者是由遗传因素引起的。临床上治疗遗传性耳聋除了佩戴助听器或者人工耳蜗，尚无其他的有效的治疗药物。基因治疗策略如外源基因替换策略已经成功运用于耳聋恢复的研究，但这种替换策略并不适用于所有类型的疾病如显性遗传、显性负效应疾病等。

2、otof基因突变可引起一种常染色体隐性非综合征型听力损失dfnb9(omim601071)。otof基因编码otoferlin(耳畸蛋白)，它是一种膜钙结合蛋白，负责内毛细胞(inner hair cell，ihc)带状突触处突触囊泡的神经递质释放。otof基因的p.q829x突变(c.2485c>t)(氨基酸同源比对在小鼠中是c.2482c>t，p.q828x)是最常见的突变位点之一，约占西班牙常染色体隐性非综合症型听力损失患者的3～4.4％。携带纯合p.q829x基因突变的dfn本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于修复OTOF基因p.Q829X突变的单碱基编辑系统，其特征在于，所述单碱基编辑系统包括：腺嘌呤碱基编辑器和sgRNA，所述sgRNA的靶向序列如SEQ ID NO.1所示。

2.如权利要求1所述的用于修复OTOF基因p.Q829X突变的单碱基编辑系统，其特征在于，所述腺嘌呤碱基编辑器包含腺嘌呤脱氨酶或其酶促活性成分和nCas9蛋白。

3.如权利要求2所述的用于修复OTOF基因p.Q829X突变的单碱基编辑系统，其特征在于，所述单碱基编辑系统通过AAV载体递送。

4.如权利要求3所述的用于修复OTOF基因p.Q829X突变的单碱基编辑系统，其...

【技术特征摘要】

1.一种用于修复otof基因p.q829x突变的单碱基编辑系统，其特征在于，所述单碱基编辑系统包括：腺嘌呤碱基编辑器和sgrna，所述sgrna的靶向序列如seq id no.1所示。

2.如权利要求1所述的用于修复otof基因p.q829x突变的单碱基编辑系统，其特征在于，所述腺嘌呤碱基编辑器包含腺嘌呤脱氨酶或其酶促活性成分和ncas9蛋白。

3.如权利要求2所述的用于修复otof基因p.q829x突变的单碱基编辑系统，其特征在于，所述单碱基编辑系统通过aav载体递送。

4.如权利要求3所述的用于修复otof基因p.q829x突变的单碱基编辑系统，其特征在于，所述单碱基编辑系统通过双aav载体递送，包括：

5.如权利要求4所述的用于修复otof基因p.q829x突变的单碱基编辑系统，其特征在于，所述intein n端片段的dna序列如seq id no.3所示，所述intein c端片段的dna序列如seq id no.4所示。

6.如权利要求4所述的用于修复otof基因p.q829x突变的单碱基编辑系统，其特征在于，所述腺嘌呤碱基编辑器n端片段包含：编码所述腺嘌呤脱氨酶或其...

【专利技术属性】
技术研发人员：舒易来，崔冲，汪胜义，王大奇，
申请(专利权)人：复旦大学附属眼耳鼻喉科医院，
类型：发明
国别省市：