酶突变体、酶组合物或其固定化酶及其制备虫草素的应用和方法技术

本发明专利技术涉及酶工程领域，特别涉及酶突变体、酶组合物或其固定化酶及其制备虫草素的应用和方法。该方法利用腺苷(Adenosine)作为起始原料，利用腺苷3’‑激酶(Cor3K)作用下生成3’‑磷酸腺苷(3’‑AMP)，然后利用虫草素脱磷酸酶(CorDep)生成脱水腺苷，最后在虫草素还原酶(CorRed)转化下生成虫草素。该路线非常简洁，转化率高，所用原料也非常便宜。这个转化可以分步完成，也可以一锅法一次性完成。与此同时，对于第一步和第三步转化所需要用到的辅酶ATP及NADH，还可以引入丙酮酸激酶(PcPyk)以及甲酸脱氢酶(MspFDH)进行循环再生，从而进一步降低其生产价格。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及酶工程领域，特别涉及酶突变体、酶组合物或其固定化酶及其制备虫草素的应用和方法。

技术介绍

1、虫草素又称冬虫夏草素、虫草菌素、蛹虫草菌素，别名3’-脱氧腺苷,化学式为c10h13n5o3，是第一种从真菌中分离出来的核苷类抗生素。其应用历史悠久，具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等多种药理活性，三期临床实验数据也显示虫草素可用于治疗急性前b和前t淋巴细胞白血病患者。近年来生物学研究进一步发现虫草素可以增强人类免疫力和清楚因人老龄化引起的体内自由基增加的功效。

2、目前虫草素主要是通过人工培育的蛹虫草中提取分离获得，制备成本高、价格昂贵、污染大且规模化受限。化学合成法则以腺苷为原料，通过多步骤的基团保护操作、自由基还原然后脱保护得到；整个合成步骤繁琐、收率低、生产价格昂贵。

3、虫草素是天然化合物，通过生物法制备具有环境兼容、产品品质高以及价格便宜的优势。虫草素的生物合成研究早有报道，原料腺苷在cns3激酶的作用下磷酸化得到3’-磷酸腺苷(3’-amp),然后在cns2酶的作用下脱磷酸得2’-糖基-3’-脱氧腺苷，最本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.酶的突变体，其特征在于，所述酶包括虫草素激酶(Cor3K)、虫草素脱磷酸酶(CorDep)、虫草素还原酶(CorRed)、丙酮酸激酶(PcPyK)和/或甲酸脱氢酶(MspFDH)中的一种或多种；

2.如权利要求1所述的酶的突变体，其特征在于，所述虫草素激酶(Cor3K)来源于多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron,Uniprot ID:Q8AAQ1,EC 2.7.1.25)；

3.如权利要求1或2所述的酶的突变体，其特征在于，所述酶的突变体包括虫草素激酶(Cor3K)的突变体、虫草素脱磷酸酶(CorDep)的突变体、虫草素还原酶(...

【技术特征摘要】

1.酶的突变体，其特征在于，所述酶包括虫草素激酶(cor3k)、虫草素脱磷酸酶(cordep)、虫草素还原酶(corred)、丙酮酸激酶(pcpyk)和/或甲酸脱氢酶(mspfdh)中的一种或多种；

2.如权利要求1所述的酶的突变体，其特征在于，所述虫草素激酶(cor3k)来源于多形拟杆菌(bacteroides thetaiotaomicron,uniprot id:q8aaq1,ec 2.7.1.25)；

3.如权利要求1或2所述的酶的突变体，其特征在于，所述酶的突变体包括虫草素激酶(cor3k)的突变体、虫草素脱磷酸酶(cordep)的突变体、虫草素还原酶(corred)的突变体、丙酮酸激酶(pcpyk)的突变体和/或甲酸脱氢酶(mspfdh)的突变体；

4.酶组合物或其固定化酶，其特征在于，包括如权利要求1至3任一项所述的酶的突变体。

5.编码如权利要求1至3任一项所述的酶的突变体或如权利要求4所述酶组合物或其固定化酶的核酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄华，张新帅，刘寒，冯晨曦，沈钶，张雨坤，
申请(专利权)人：华南师范大学，
类型：发明
国别省市：