【技术实现步骤摘要】
本申请涉及活性物质制备，尤其涉及一种转化人参皂苷ck为人参皂苷f1的酶及其制备方法和应用。
技术介绍
1、人参，以其多功能、多靶点闻名于世，这主要依赖于其中的皂苷类成分，天然的活性人参皂苷主要是四环三萜达玛烷型皂苷，分为二醇和三醇两大类。随着研究的深入，学者们发现这些含有3-4个糖基的天然的人参皂苷并不是直接发挥药效的结构，这些成分需要在体内代谢成1-2个糖基的次级人参皂苷后才被吸收并发挥功效。但是这种体内的转化率很低，也就造成药物利用不充分，因此在体外将多糖基皂苷转变成低糖基皂苷一直是研究的热点。
2、以往都是围绕利用水解酶切掉糖基来制备，例如制备三醇类稀有人参皂苷f1，用re、r1、rg1做底物，将糖基逐个水解，转化生成f1，而中间往往伴随着中间产物，难以全部转化成终端产物，后期分离成本较高，难以获得高纯度的f1。而与f1结构类似的二醇类皂苷ck，同样是在20-o-带有一个葡萄糖基，结构上只有在6-o-位上的一个羟基的差异，如果能将ck 6-c-位上连接一个羟基，就可以生成f1，由于两者结构的特点，他们之间不存在其他中间产物，目前还没有此类转化的相关报道。
技术实现思路
1、本申请实施例提供一种转化人参皂苷ck为人参皂苷f1的酶及其制备方法和应用，以解决相关技术存在的问题，技术方案如下：
2、第一方面，本申请实施例提供了一种转化人参皂苷ck为人参皂苷f1的酶，所述酶以枯草芽胞杆菌枯草亚种为发酵菌种，经种子制作、扩培、激活产酶、提取得到；
3、
4、在一种实施方式中，所述人参皂苷re、rg1和rg2的质量比为1:(1-2):(0.5-1)。
5、在一种实施方式中，异丙醇和水的质量比为1:(3-10)；所述异丙醇和水总质量为人参皂苷总质量的10-20倍。
6、在一种实施方式中，所述种子制作在种子培养基中实现，种子培养基包括以下按重量份的组成：
7、5-20份葡萄糖、3-10份可溶性淀粉、10-20份蛋白胨、1-3份氯化钠、1-5份氯化钾、0.1-1份牛肉膏和800-1200份水。
8、在一种实施方式中，培养的条件为：
9、所述种子培养的温度为28～30℃，种子培养的时间为3～5d。
10、在一种实施方式中，扩培在发酵培养基中进行，发酵培养基包括以下按重量份的组成：
11、10-20份葡萄糖、3-10份可溶性淀粉、10-20分蛋白胨、1-3份氯化钠、1-5份氯化钾、0.1-1份牛肉膏、5-15份异丙醇、5-15份丁二醇和800-1200份水。
12、在一种实施方式中，激活产酶过程为在所述发酵培养基中加入所述诱导剂，所述诱导剂的加入量为所述发酵培养基质量的3-8％。
13、在一种实施方式中，扩培过程的条件为：于34-38℃发酵培养12-48h。
14、在一种实施方式中，激活产酶过程的条件为：于34-38℃发酵培养24-48h。
15、在一种实施方式中，提取步骤为：产酶完成后，离心除去菌体；在上清液中加入35％-50％饱和度硫酸铵，静止；固液分离，得到沉淀即为所述转化人参皂苷ck为人参皂苷f1的酶。
16、第二方面，本申请实施例提供了一种转化人参皂苷ck为人参皂苷f1的方法，其特征在于，以人参皂苷ck为原料，上述转化人参皂苷ck为人参皂苷f1的酶为催化剂进行转化反应。
17、在一种实施方式中，转化反应在溶液中进行，所述溶液为ph＝6.0、浓度为0.1m的柠檬酸缓冲液；人参皂苷ck与缓冲液的质量比为1：(20-100)。
18、在一种实施方式中，人参皂苷ck与酶的质量比为1：(0.4-2)。
19、在一种实施方式中，反应的条件为：在40-50℃反应12-72h。
20、在一种实施方式中，转化反应后包括后处理步骤：
21、固液分离后，沉淀物经乙醇重结晶，得到所述人参皂苷f1。
22、上述技术方案中的优点或有益效果至少包括：
23、本申请的一种转化人参皂苷ck为人参皂苷f1的酶，该酶以枯草芽胞杆菌枯草亚种为发酵菌在诱导剂下发酵培养得到。在该酶的催化作用下能够在人参皂苷ck的6-o-位上连接一个羟基，从而高效的将人参皂苷ck转化为了人参皂苷f1，这就为制备得到人参皂苷f1提供了一种新的途经和方法。该酶催化的转化反应过程不会对糖基产生影响，因此没有中间产物产生，并且转化率高，达到93.72％，选择性强；因此转化反应结束后，经简单的后处理即可以得到纯的人参皂苷f1。
24、上述概述仅仅是为了说明书的目的，并不意图以任何方式进行限制。除上述描述的示意性的方面、实施方式和特征之外，通过参考附图和以下的详细描述，本申请进一步的方面、实施方式和特征将会是容易明白的。
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1.一种转化人参皂苷CK为人参皂苷F1的酶，其特征在于，
2.根据权利要求1所述的一种转化人参皂苷CK为人参皂苷F1的酶，其特征在于，
3.根据权利要求1或2所述的一种转化人参皂苷CK为人参皂苷F1的酶，其特征在于，
4.根据权利要求1所述的一种转化人参皂苷CK为人参皂苷F1的酶，其特征在于，
5.根据权利要求1所述的一种转化人参皂苷CK为人参皂苷F1的酶，其特征在于，
6.根据权利要求1所述的一种转化人参皂苷CK为人参皂苷F1的酶，其特征在于，
7.根据权利要求1所述的一种转化人参皂苷CK为人参皂苷F1的酶，其特征在于，
8.一种转化人参皂苷CK为人参皂苷F1的方法，其特征在于，以人参皂苷CK为原料，权利要求1-7任一项所述的转化人参皂苷CK为人参皂苷F1的酶为催化剂进行转化反应。
9.根据权利要求8所述的一种转化人参皂苷CK为人参皂苷F1的方法，其特征在于，
10.根据权利要求8所述的一种转化人参皂苷CK为人参皂苷F1的方法，其特征在于，
【技术特征摘要】
1.一种转化人参皂苷ck为人参皂苷f1的酶，其特征在于，
2.根据权利要求1所述的一种转化人参皂苷ck为人参皂苷f1的酶，其特征在于，
3.根据权利要求1或2所述的一种转化人参皂苷ck为人参皂苷f1的酶，其特征在于，
4.根据权利要求1所述的一种转化人参皂苷ck为人参皂苷f1的酶，其特征在于，
5.根据权利要求1所述的一种转化人参皂苷ck为人参皂苷f1的酶，其特征在于，
6.根据权利要求1所述的一种转化人参皂苷ck为人...
【专利技术属性】
技术研发人员：肖永坤，王东明，
申请(专利权)人：三蚁科技广州有限公司，
类型：发明
国别省市：
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